收藏本站
收藏 | 论文排版

B7-H4分子的抗体制备及其在肿瘤研究中的应用

陶岚  
【摘要】: 背景: B7-H4,又称B7S1或B7x,是共刺激分子B7家族的最新成员,为Ⅰ型跨膜糖蛋白,编码282个氨基酸。由美国Mayo医学中心于2003年发现,是B7家族相关的第3个T细胞抗原特异性反应的负性调控分子。人B7-H4的cDNA长约1.8Kb,位于人的染色体1p11.1,在基因组上跨越66Kbp。B7-H4的mRNA在淋巴和非淋巴组织中都有表达,但免疫组化显示,B7-H4蛋白仅在部分正常组织中微弱的表达。B7-H4可以在活化的人T细胞、B细胞、巨噬细胞、DC细胞上呈诱导性表达。业已发现,一些肿瘤细胞也呈组成性表达B7-H4,如乳腺癌、卵巢癌和肺癌等。对小鼠组织的Northern Blot实验发现,根据组织类型的不同,小鼠的B7-H4共有四种不同的mRNA剪切形式。RT-PCR分析显示,人类的组织至少拥有两个转录本。研究表明,正常外周组织能在翻译水平对B7-H4的表达进行严密的调控。 在机体的免疫应答过程中,B7-H4作为重要的共刺激分子,在CD4~+、CD8~+T细胞的分化发育、细胞周期进展以及细胞因子的产生等方面发挥广泛的抑制效应。B7-H4对外周组织的细胞免疫应答起着负性调节的作用,且由于其特异性表达于某些肿瘤细胞表面,因而可能在机体的肿瘤免疫逃避机制中起着重要作用。 因此,B7-H4分子途径为肿瘤、自身免疫性疾病和抗病毒及移植排斥反应等疾病提供了新的治疗思路。阻断B7-H4与其受体的相互作用,有望成为干预自身免疫性疾病和肿瘤生物治疗的潜在靶点。 目的: 为了更深入研究B7-H4与肿瘤免疫的关系,本实验设计并合成了人B7-H4多肽,应用该多肽制备了兔抗人B7-H4多克隆抗体,并应用该抗体研究B7-H4分子在多种肿瘤细胞和肿瘤组织中的表达,并探讨其意义。 方法: 1.根据GenBank公布的序列(AAP37283),利用计算机辅助设计,确定并人工合成B7-H4抗原多肽,并用Keyhole Limpet Hemocyanin(KLH)交联以增强B7-H4抗原多肽的免疫原性。将交联KLH的B7-H4抗原肽免疫新西兰兔(经初次免疫和四次加强免疫)后获取免疫兔血清,亲和纯化法纯化兔血清中的抗B7-H4抗体。采用直接ELISA法、Western-blot免疫印迹鉴定抗B7-H4抗体的效价、反应的特异性和敏感性; 2.免疫组织化学染色检测组织芯片上多种肿瘤组织中人B7-H4蛋白的表达情况; 3.根据GenBank公布的序列(NM_024626),合成了h B7-H4的PCR引物,应用RT-PCR检测多种肿瘤细胞株中人B7-H4mRNA的表达; 4.Western-Blot检测多种肿瘤细胞株中人B7-H4蛋白的表达。 结果: 1.成功制备了兔抗人B7-H4多克隆抗体; 2.免疫组化检测结果显示肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、结肠癌、直肠癌及肾癌等多种肿瘤组织的细胞膜和细胞浆均有B7-H4蛋白的阳性染色,而在各种对照的正常组织中仅表达为阴性至弱阳性; 3.RT-PCR结果显示8种肿瘤细胞株在目的条带1200bp左右处均有B7-H4mRNA的表达; 4.Western-Blot检测9种细胞株中B7-H4蛋白的表达,结果显示A549、MCF-7、SK-BR-3、CaoV3、SK-OV-3、SiHa、HeLa、HepG2等肿瘤细胞株均表达B7-H4蛋白,而A293细胞株未检测到B7-H4蛋白表达。 结论: 1.成功制备了兔抗人B7-H4多克隆抗体; 2.肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、结肠癌、直肠癌及肾癌等多种肿瘤组织的细胞膜和细胞浆均有B7-H4蛋白的阳性染色; 3.A549、MCF-7、SK-BR-3、CaoV3、SK-OV-3、SiHa、HeLa、HepG2等肿瘤细胞株均有B7-H4mRNA和B7-H4蛋白的表达;


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈长春;李婉宜;章崇杰;魏大鹏;邝玉;;抗人SOCS3单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定[J];南方医科大学学报;2007年11期
2 李之源;肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体制备及其对病毒抗原特性的鉴定[J];第四军医大学学报;1994年05期
3 杨诏旭,窦科峰,路凡,赵忠良;GST-Gankyrin融合蛋白的原核表达及抗体制备[J];第四军医大学学报;2005年11期
4 莫发荣;谢小薰;罗国容;;抗体制备的新技术[J];医学综述;2007年01期
5 于保锋;陈显久;王惠珍;张悦红;程牛亮;牛勃;;抗双胸蚓核酸酶EWD_2多克隆抗体的制备及鉴定[J];山西医科大学学报;2007年12期
6 赵伟;魏晨曦;夏莹;杨旭;丁书茂;袁均林;;苯甲酸人工抗原的合成与免疫效价的测定[J];食品科学;2009年03期
7 任玉珊;韩钰;曹春雨;王艳林;;精胺/精眯N~1-乙酰基转移酶重组蛋白的原核表达及其抗体制备[J];肿瘤防治研究;2009年06期
8 王彩红;宁保安;王红勇;李晓莉;刘晶;连璐;高志贤;;消减免疫法制备氨苄青霉素抗体[J];解放军预防医学杂志;2010年02期
9 张磊;崔柳青;李杰;刘红涛;薛乐勋;;杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶重组蛋白的纯化及其多克隆抗体制备[J];郑州大学学报(医学版);2010年06期
10 陈建飞;金先庆;丁雄辉;孙艳辉;赵利华;郭振华;王士奇;;新耐药基因HA117多克隆抗体的制备与鉴定[J];第三军医大学学报;2011年11期
11 吴绍沅;新的单克隆放射免疫测定试验检测HBeAg/抗-HBe[J];国际生物制品学杂志;1986年03期
12 景涛;不同免疫接种方法在单克隆抗体制备中的应用及比较[J];中国人兽共患病杂志;2000年04期
13 杨煜,劳凤学,高振平,徐桂月,张鹏宇,柳忠辉;重组人FS315C末端蛋白表达及其抗体制备[J];中国生物工程杂志;2005年08期
14 赵庆国;周煜;朱恒奇;卢柏松;黄培堂;;小鼠FANCL抗体制备及组织表达谱分析(英文)[J];遗传学报;2006年01期
15 邓少丽;胡福泉;蹇锐;饶贤才;蒋静;程小星;;转录因子Blimp-1的原核表达、纯化及抗体制备[J];第三军医大学学报;2006年03期
16 宋庆贺;于欣平;陈苏民;陈南春;代忠明;侯立朝;;人Lrp蛋白在细胞中的定位及LPS对其表达的影响[J];中国生物化学与分子生物学报;2006年07期
17 孙其飞;高媛;刘细保;孙启鸿;王松灵;;兔抗人唾液酸转运蛋白抗体的制备及特性鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年04期
18 钱王争;陈孙孝;周晔;谷明莉;陈燕;孔宪涛;邓安梅;仲人前;;抗Granulysin多克隆抗体的制备及鉴定[J];中国现代医学杂志;2007年11期
19 郑树涛;刘忠渊;张富春;;小分子肽制备抗体方法的研究进展[J];细胞与分子免疫学杂志;2008年03期
20 李淑珍;刘莹;陈苗;柳晓兰;唐小波;高建恩;朱大岭;孙启鸿;;抗PLA2G13多克隆和单克隆抗体的制备与鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2008年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王磊;李建喜;张景艳;杨志强;王学智;张凯;孟嘉仁;;喹乙醇单克隆抗体制备中细胞融合条件的筛选[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
2 董青;单保恩;陈兴;董金琢;马洪;;抗Syk抗体制备和检测[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
3 霍飞凤;白玉;刘虎威;;植物激素赤霉素的多克隆抗体制备[A];全国生物医药色谱学术交流会(2010景德镇)论文集[C];2010年
4 李晓军;贾丽;仲爱芳;虞伟;;重组人Id3融合蛋白表达及其抗体制备[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
5 巩薇;卫礼;贺争鸣;;鼠痘病毒抗体制备方法的研究[A];中国实验动物学会第五届学术年会论文汇编[C];2000年
6 李晨;冯丹丹;史小娟;刘伟;刘惠君;罗自强;;Clara细胞分泌蛋白结合蛋白UGBP的多克隆抗体制备及表达研究[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年
7 仇旭升;孟春春;徐丹;陈鸿军;于圣青;丁铲;;新城疫病毒V蛋白C端结构域的表达及抗体制备[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
8 王永丽;梁建芳;郑绘霞;肖虹;程彩霞;李宁;;卵巢上皮性肿瘤中B7-H4表达及临床意义[A];2009年“临床诊断和治疗新进展研究”暨“全国肿瘤病理诊断交流”研讨会论文集[C];2009年
9 肖艳群;张健;陈慧英;邵维杰;蒋玲丽;简敏华;陆银华;徐翀;;人α烯醇化酶基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
10 戚炜;宋保亮;杨金波;李伯良;;转录因子Cdx-2的抗体制备及其在内源性表达与顺式结合元件分析中的应用[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蒋敬庭;协同刺激分子B7-H4在胃癌组织中的表达及其临床意义[D];苏州大学;2011年
2 陈成;负性协同刺激分子B7-H4在肺癌免疫逃逸中的作用及其机制[D];苏州大学;2012年
3 汪家敏;抗人CD133-2单克隆抗体的研制及CD133-2分子在肿瘤细胞中的表达及其临床意义[D];苏州大学;2009年
4 吴汉林;人NIT1基因cDNA的克隆、原核表达及抗体制备[D];四川大学;2005年
5 张敏敏;人Hedgehog信号通路配体SHH的N末端蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[D];第二军医大学;2006年
6 朱飞舟;帕金森病相关基因LRRK2蛋白的抗体制备、神经解剖学分布及亚细胞定位[D];中南大学;2007年
7 孙凤霞;三聚氰胺单克隆抗体制备及其高灵敏快速检测技术研究[D];江南大学;2011年
8 孙玉萍;共刺激分子B7-H3、B7-H4和ILT4在非小细胞肺癌中表达的研究[D];山东大学;2005年
9 田梅;晚期氧化蛋白产物单克隆抗体制备的实验及应用研究[D];第三军医大学;2009年
10 侯巍;H-FABP表达、单克隆抗体制备、测定方法建立及临床应用研究[D];吉林大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡英会;B组轮状病毒WH-2株vp7基因的原核表达及抗体的制备[D];华中师范大学;2007年
2 李国田;小麦条锈菌角质酶基因的克隆、表达及功能分析[D];西北农林科技大学;2008年
3 张云现;鸡传染性法氏囊病毒的分离鉴定及其免疫组化检测方法的建立[D];安徽农业大学;2008年
4 张健;人ndrg家族成员cDNA的克隆、表达及抗体制备[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
5 颜新敏;人表皮生长因子的克隆、表达及其表达产物的初步鉴定[D];扬州大学;2004年
6 王丽英;己烷雌酚抗体的制备与ELISA方法的建立[D];江南大学;2007年
7 聂宇;八肋游仆虫Rab家族基因的多样性及一种非典型Rab蛋白的功能分析[D];山西大学;2008年
8 贾如;细粒棘球蚴Eg95基因的克隆、原核表达及抗体制备[D];合肥工业大学;2009年
9 陶岚;B7-H4分子的抗体制备及其在肿瘤研究中的应用[D];浙江大学;2008年
10 吴盛鹏;B7-H4在前列腺癌中的表达及临床意义[D];中南大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 胡德荣;肝癌疫苗进入二期临床[N];健康报;2004年
2 许可臻;上海生物医药重大突破注射疫苗可杀灭肝癌细胞[N];医药导报;2004年
3 文建平;生物医药外包相中中国[N];医药经济报;2004年
4 记者 姜云飞;海归博士欲建抗体“世界工厂”[N];大连日报;2006年
5 本报记者 付毅飞;170余种新品诞生在生物芯片研究与开发课题组[N];科技日报;2006年
6 本报记者  朱国旺;战地黄花分外香[N];中国医药报;2006年
7 王晴;我国成功克隆世界首头转人基因奶牛[N];陕西科技报;2008年
8 本报记者 余向东;渔业科技创新的践行者[N];中国渔业报;2009年
9 汪敏华;新药研发“外包”抢滩沪上[N];中国医药报;2004年
10 于建平;百泰工程研究院成立 中古生物技术合作深化[N];中国高新技术产业导报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978