两种双生病毒伴随的卫星启动子的鉴定

【摘要】： DNAβ是与某些单组份双生病毒相伴随的卫星分子,能在自然寄主上引起典型侵染症状。迄今发现的所有DNAβ分子在互补链上都编码一个大小和位置保守的βCl基因,它是一种致病决定因子。关于βCl基因启动子的研究,目前的研究报道还很少。赛葵黄脉病毒(MYVV)和中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)均是本实验室鉴定的伴随有DNAβ分子的单组份双生病毒,为了进一步明确它们伴随的卫星DNA启动子对病毒症状的调节作用,本论文分离并鉴定了TYLCCNV Y25分离物(TYLCCNV-Y25)和MYVV Y47分离物(MYVV-Y47)DNAβ分子上βCl基因的启动子。 利用根癌土壤杆菌介导的方法鉴定了MYVV-Y47 DNAβ分子上βCl基因的启动子。用GUS和GFP基因做为报告基因,通过组织化学法和荧光光度法测定启动子的活性。瞬时表达结果表明,MYVV-Y47βCl基因翻译起始位点上游的991核苷酸(nt)片段具有启动子活性;5'端缺失的片段以及A-rich区缺失的片段均保留了启动子活性;与花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子相比,991 nt片段的启动子活性最高,是35S启动子活性的28.05%。对启动子进行遗传转化后进行组织化学检测表明,翻译起始位点上游的991 nt和214 nt片段均能够驱动GUS基因在转基因普通烟植株中组成型表达。 利用根癌土壤杆菌介导的方法鉴定了TYLCCNV-Y25 DNAβ分子上βCl基因的启动子。用GUS基因做为报告基因,通过组织化学法和荧光光度法测定启动子的活性。瞬时表达结果表明,TYLCCNV-Y25βCl基因翻译起始位点上游的982 nt片段具有启动子活性,其活性是CaMV 35S启动子活性的46.23%。5'端以及A-rich区都缺失的206 nt片段保留有启动子活性并且其活性与982 nt片段的启动子活性没有显著性差异。