收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

内质网应激参与细胞脂肪变性的研究

刘江  
【摘要】: 1、目的 随着生活水平的提高,生活方式的日益西化,非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)的发病率日益升高。NAFLD包括一系列相互联系的病理改变,从单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎,到肝纤维化和肝硬化,甚至可以进展为肝细胞癌。NAFLD已经成为影响我们健康的潜在的重大疾病隐患。并且愈来愈多的资料表明,NAFLD是心脑血管事件和肥胖相关死亡事件的独立相关的疾病。目前认为,NAFLD与肥胖、糖尿病、高脂血症等代谢综合征密切相关,高脂饮食是引起肥胖及其相关并存症高发的重要原因。而高脂饮食往往合并有血浆游离脂肪酸的升高,游离脂肪酸可以诱导肝细胞的单纯脂肪变性,但其确切的发病机制尚未明确。内质网应激已被证实参与多种疾病的分子机制,包括肥胖和2型糖尿病,后两者都是NAFLD的高危因素。明确内质网应激是否参与了游离脂肪酸诱导的细胞脂肪变性模型的脂变形成过程,并探讨药物比如二甲双胍对内质网应激的潜在影响,对于防治NAFLD具有重要的现实意义。 2、方法 2.1培养和处理细胞 常规10%胎牛血清MEM培养液培养HepG2,当细胞生长到约70-80%融合度时,消化传代,更换培养液进行分组。对照组换用10ml新鲜的10%胎牛血清MEM培养液;二甲双胍组换用10ml新鲜的10%胎牛血清MEM培养液的同时加入0.4ml的50mM二甲双胍的母液(即终浓度为2 mM);游离脂肪酸组换用10ml含有1mM游离脂肪酸混合物(2:1油酸:棕榈酸)的10%胎牛血清MEM培养液;干预组换用10ml含有1mM游离脂肪酸混合物的10%胎牛血清MEM培养液的同时加入0.4ml的50mM二甲双胍的母液(即终浓度为2 mM)。培养24小时后收获各组细胞,检测细胞活力和脂质含量及后续的PCR和WESTERN BLOT. 2.2逆转录PCR 分别提取各组HepG2细胞的总RNA,按照反转录盒提供的说明书合成cDNA。设计及合成葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和固醇调节元件结合蛋白1c (SREBP1c)以及脂肪酸合成酶(FAS)的引物,以cDNA作模板,在常规PCR仪上进行PCR扩增。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分析,用PDQuest半定量分析比较各个PCR产物条带灰度,以目的基因/β-actin mRNA相对值半定量目的基因,分析比较以上表达水平的差异。 2.3 Western blot 分别裂解细胞后,用BCA法定量蛋白,检测各组葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和固醇调节元件结合蛋白1c (SREBP1c)表达水平,显色、暴光、显影、定影后,吹干,将胶片进行扫描,用凝胶图像处理系统分析目标带的净光密度值,以目的蛋白/GAPDH相对值半定量目的蛋白,分析比较以上表达水平的差异。 3、结果 游离脂肪酸组诱导的细胞脂肪变性模型的HepG2细胞内的甘油三酯,GRP78的]mnRNA和蛋白表达水平,SREBP1c的mRNA和蛋白表达水平,以及FAS mRNA分别表达水平是298.00±59.63 mmol/mg protein,1.67±0.20,2.21±0.20,0.89±0.22,1.44±0.14,1.00±0.10,与对照组、二甲双胍组比较,均明显升高,有显著性差异(p0.05)。而干预组的HepG2细胞的甘油三酯、GRP78的mRNA和蛋白表达水平,SREBP1c的mRNA和蛋白表达水平,以及FAS mRNA表达水平分别是270.33±91.82mmol/mg protein,1.50±0.15,1.28±0.34,0.84±0.29,1.18±0.10,0.89±0.19较游离脂肪酸组均有所下降,但是没有显著性差异。然而值得注意的是干预组与游离脂肪酸组的GRP78的mRNA和蛋白质水平比较,尽管没有显著性差异,但是P值接近0.05(P分别为0.053,0.054)。 4、结论 内质网应激参与了游离脂肪酸诱导的细胞脂肪变性模型的脂变形成过程。内质网应激可能是非酒精性脂肪肝发病机制中新的干预靶点和治疗靶点。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 盛美红;崔磊;龚沈初;黄胜;季娟;何伯圣;陈浩;;含脂肪成分肝脏病变的CT鉴别诊断[J];临床放射学杂志;2011年07期
2 Lisa YERIAN;黄珊珊;钱本余;马雄;;脂肪性和酒精性肝病的组织病理学评估[J];胃肠病学;2011年03期
3 曹伟;赵彩彦;;线粒体功能不全与非酒精性脂肪性肝病[J];肝脏;2011年03期
4 高瑞萍;彭见林;刘辉;赵国华;;脂肪酸分析方法研究进展[J];食品工业科技;2011年08期
5 李嘉强;戴颖秀;刘玉敏;郑基;刘文斌;;代谢综合征不同组分患者血清脂联素与游离脂肪酸谱代谢参数的比较[J];中国糖尿病杂志;2007年06期
6 刘甲兴;芮磊;;非结合型游离脂肪酸及心型脂肪酸结合蛋白的临床应用[J];中国动脉硬化杂志;2011年05期
7 常显星;俞丽芬;;非酒精性脂肪性肝病与心血管疾病的临床相关性研究进展[J];国际消化病杂志;2011年03期
8 王睿;吴国亭;王广宇;屈晶晶;;过表达骨桥蛋白对游离脂肪酸诱导RIN m5f细胞凋亡的保护作用[J];同济大学学报(医学版);2011年03期
9 杨伟;李耘;;老年2型糖尿病患者血清抵抗素、游离脂肪酸水平研究[J];中华实用诊断与治疗杂志;2011年09期
10 谷腾飞;赵明;蒋鹏;王珊珊;;参麦注射液对缺血-再灌注损伤大鼠心肌H-FABP和血清FFA的影响[J];临床麻醉学杂志;2011年06期
11 石力;汤礼军;陈涛;崔建峰;李运明;邹洪;田伏洲;;2型糖尿病患者胃转流术后游离脂肪酸的改变及其意义[J];中国普通外科杂志;2011年09期
12 佘美华;侯洪杰;胡小波;尹卫东;;褪黑素改善胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖的摄取[J];中国生化药物杂志;2011年04期
13 韩萍;卢雁;夏菲;张咏言;何冰;张微;;多不饱和脂肪酸对大鼠肝脏甘油三酯蓄积和胰岛素抵抗的影响[J];中国糖尿病杂志;2007年07期
14 修双玲;王立;;老年2型糖尿病肥胖患者游离脂肪酸和C反应蛋白水平的变化[J];疑难病杂志;2011年07期
15 徐先静;王丽霞;黄改荣;段明勤;曹选超;;代谢综合征患者血清脂蛋白脂酶含量变化的临床对照研究[J];中国卫生检验杂志;2011年08期
16 韩乐;刘晓玲;李荣山;李媛;郭海莲;;游离脂肪酸对人近曲肾小管上皮细胞HK-2的影响及作用机制[J];中国现代医生;2011年12期
17 王春晖;卿笃信;;软脂酸对酒精体外诱导的脂肪变性肝细胞的作用及机制[J];世界华人消化杂志;2011年19期
18 周鹏;朱大龙;西琳·玉努斯;张燕;关黎清;周歆理;关英芝;叶尔肯·多森拜克;;控制高甘油三酯血症对胰岛β细胞分泌功能和糖代谢的影响[J];中国糖尿病杂志;2007年03期
19 左玲;宁乐平;;荆门地区长寿老人血浆FFA亚组分及血脂分析[J];医学综述;2011年12期
20 李步满;高彦彬;吴丽丽;周晖;张涛静;夏晶;邹大威;朱智耀;吴深涛;;糖脂平对2型糖尿病大鼠糖、脂毒性及胰腺组织氧化应激的影响[J];中国实验方剂学杂志;2011年14期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张永胜;;小针刀治疗脂肪变性增生奇效一例[A];第四届全国针刀医学学术交流大会论文集[C];1996年
2 杨林辉;陈东风;;油酸诱导培养肝细胞脂肪变性模型的建立[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
3 陈少东;冯琴;彭景华;许丽莉;胡义扬;;茵陈醇提物体外抗游离脂肪酸脂毒性作用及其机理研究[A];第十八次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2009年
4 江远;张玲;何金洋;郭兴伯;;铁超载和脂肪堆积在二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化中的组织病理学变化[A];全国第2届中西医结合传染病学术会议暨国家中医药管理局第1届传染病协作组会议论文汇编[C];2008年
5 胡义扬;何东仪;刘平;刘成;薛惠明;熊卫国;李风华;;健脾活血方对CCl_4高脂低蛋白诱导大鼠肝脂肪变性的影响[A];中国中西医结合学会第十二次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2000年
6 马良坤;罗恋梅;杨剑秋;;妊娠期急性脂肪肝的临床诊断与治疗[A];2007年中华医学会—强生西部学术讲座全国产科危重症学术研讨会论文汇编[C];2007年
7 阙冰玲;宋向荣;蔡婷峰;邓莹玉;葛怡琛;李来玉;唐小江;;豚鼠三氯乙烯中毒性肝损伤的作用剂量研究[A];中国毒理学会第二届全国中青年学者科技论坛会议论文集[C];2007年
8 陈波;周光宏;邹思湘;陈伟华;;游离脂肪酸对肉鸡肠道吸收代谢类胡萝卜素的影响[A];第四届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2002年
9 阎明;孟繁立;吕瑞娟;贾晓青;赵宪邨;;药物性脂肪肝血清游离脂肪酸谱的变化及意义[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
10 吴志香;于世家;;高浓度游离脂肪酸在不同葡萄糖浓度协同作用下对胰岛细胞凋亡影响的观察[A];2008内分泌代谢性疾病系列研讨会暨中青年英文论坛论文汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘江;内质网应激参与细胞脂肪变性的研究[D];浙江大学;2010年
2 张雪群;非酒精性脂肪性肝病发生发展的蛋白质组学研究[D];浙江大学;2008年
3 熊宇芳;LOX-1介导ox-LDL导致eNOS去磷酸化的新机制:内质网应激的作用[D];华中科技大学;2010年
4 高小玲;内质网应激在双氢青蒿素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用研究[D];重庆医科大学;2010年
5 张爱梁;依达拉奉对脊髓缺血再灌注损伤保护作用的机制研究[D];南京医科大学;2011年
6 韩巧君;人体空腹状态下运用正电子发射型计算机断层显像评估局部游离脂肪酸摄取[D];第二军医大学;2012年
7 王凤;拟南芥内质网上的Profilin2蛋白结合蛋白的分离与纯化[D];中国农业大学;2005年
8 曹献英;纳米羟基磷灰石诱导肝癌细胞死亡的作用靶点及机理研究[D];武汉理工大学;2005年
9 张海峰;游泳训练防治非酒精性脂肪性肝炎的效果及机制研究[D];河北师范大学;2007年
10 侯新国;游离脂肪酸在代谢综合症中的作用及干预研究[D];山东大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴栋;肝脂康治疗非酒精性脂肪肝的实验研究[D];山西医科大学;2008年
2 秦亮;内质网应激通过AKT-TSC-mTOR信号通路调控自噬[D];中国协和医科大学;2010年
3 侯丽丽;Bim在黑色素瘤细胞内质网应激状态中的异常调控及作用[D];安徽医科大学;2011年
4 奚丹;小分子化合物S1诱导B16细胞凋亡机制的研究[D];吉林大学;2011年
5 黄汉鹏;A类清道夫受体通路抑制内质网应激诱导的巨噬细胞自噬[D];南京医科大学;2010年
6 康立;妊娠期糖尿病患者脂代谢变化及脂毒性的研究[D];大连医科大学;2005年
7 刘新凤;2型糖尿病正常糖耐量一级亲属血清游离脂肪酸和丙二醛水平及相关因素研究[D];山东大学;2005年
8 陈颖;脂代谢紊乱对肾小管上皮细胞hUAT基因表达的影响[D];青岛大学;2006年
9 潘丽丽;游离脂肪酸对人脐静脉内皮细胞eNOSmRNA及ET-1mRNA表达水平的影响[D];河北医科大学;2004年
10 张贺;中国沙棘籽油提取工艺研究[D];吉林农业大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 成都 代廷荣;急性肝脂肪变性脑病蛮凶险[N];大众卫生报;2003年
2 王红霞;节后赶快给肝脏“瘦身”[N];医药养生保健报;2009年
3 副主任医师 陈继英;多管齐下治疗脂肪肝[N];医药经济报;2009年
4 钱铮;细胞内质网正常释放钙离子的机制被发现[N];医药经济报;2007年
5 吴国隆;空腹运动危害大[N];中国医药报;2002年
6 王雪飞;黄芪降低血糖机制被揭示[N];健康报;2008年
7 刘海英;神经细胞内质网功能机理揭晓[N];科技日报;2009年
8 白毅;我国学者解析水杨酸类药降糖作用新机制[N];中国医药报;2007年
9 南京农业大学 邵涛;油脂品质与饲料安全息息相关[N];中国畜牧兽医报;2006年
10 余微;美味营养炒出来[N];保健时报;2003年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978