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血链球菌/牙龈卟啉单胞菌单一及复合生物膜对血小板聚集的作用

屠彦  
【摘要】: [目的] 血链球菌(Ss)是一种与许多疾病相关的口腔中最常见的细菌,牙龈卟啉单胞菌(Pg)是一种与慢性牙周疾病相关的革兰氏阴性的厌氧菌。目前对它们在血小板粘附和聚集中作用的研究很少,尤其是在动态的人体环境中。本研究的目的在于结合使用静态血小板聚集仪及流动小室(血小板血栓体外模型)观察Ss/Pg促进血小板聚集及Ss-Pg结合后对血小板聚集的影响作用,并观察李施德林漱口水及西帕依固龈液对细菌促血小板聚集的抑制作用,探讨这两类口腔致病菌对冠心病的作用机制,验证药物的作用,说明其临床应用价值。 [方法] 1.血小板聚集仪:用肾上腺素溶液和PBS溶液作为阳性和阴性对照组,分别在等量的PRP溶液中加入等量的Ss溶液,Pg溶液,Ss+Pg的混合溶液,观察血小板聚集仪的聚集曲线变化。 2.两种含漱剂对两种细菌促血小板聚集的抑制作用:用两种不同的药物:李施德林漱口水及西帕依固龈液预处理过的Ss溶液,Pg溶液,Ss+Pg的混合溶液等量分别加入PRP溶液中,观察血小板聚集仪的聚集曲线变化。 3.流动小室系统:用荧光染料CD41人单克隆抗体(PE)对血小板进行标记。分别用肾上腺素和空白PBS培养皿作为阳性和阴性对照组,血链球菌生物膜(Ss生物膜)、牙龈卟啉单胞菌生物膜(Pg生物膜)、血链球菌和牙龈卟啉单胞菌在被覆唾液的流动小室中黏附形成的复合生物被膜(Ss-Pg复合生物膜)分别作为实验组,用流动小室使血小板溶液模拟人体血液循环流动15min,使用荧光显微镜拍摄记录血栓形成情况。 [结果] 1.血小板聚集仪:Ss溶液和Pg溶液均能引起血小板聚集,最高聚集率(均数±标准差(x±s))分别为77.67±7.37%、79.33±9.87%,Ss溶液引起聚集的时间(均数±标准差(x±s))为6.73±1.47min,明显比Pg溶液(1.56±0.21min)的聚集时间长(P<0.05); Ss+Pg溶液的最高聚集率为51.33±12.86%,低于单一的Ss溶液和Pg溶液,有显著性统计学差异(P0.05),聚集时间为1.50±0.30min,与单一的Ss/Pg溶液相比无统计学意义(P0.05)。 2.两种含漱剂对细菌促血小板聚集的抑制作用:用李施德林漱口水处理3min及西帕依固龈液处理10min的Ss溶液、Pg溶液、Ss+Pg溶液与PRP反应时,均无明显血小板聚集现象。 3.流动小室系统:可见阴性对照组无明显的血小板粘附,聚集现象;Ss生物膜组和Pg生物膜组在3min时就有血小板开始粘附,在5-15min时,两组的聚集率都达到高峰,均明显高于阴性对照组(P0.05);在Ss-Pg复合生物膜组中,血小板黏附率与阴性对照组相比并没有明显升高(P0.05),在5-15min时的聚集率明显低于Ss生物膜组和Pg生物膜组(P0.05)。 [结论] 无论是在静态环境还是在流动环境下,Ss, Pg均可促进血小板聚集,但当Ss与Pg相互混合粘附时,血小板的聚集率降低;使用李施德林漱口水及西帕依固龈液可以使细菌失去促血小板聚集的作用。结合使用静态血小板聚集系统及模拟循环系统能帮助我们更深入研究Ss及Pg促进血栓形成的动态变化,为阐明Ss和Pg的致病机制提供有利证据。


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