收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Enterobacter cloacae Z0206富硒多糖的制备、结构分析及其主要生物学功能研究

徐春兰  
【摘要】: 本研究通过对从肉灵芝上分离、纯化的产多糖菌种进行了耐硒驯化,得到了产多糖耐硒菌种Z0206,并对其进行了鉴定;通过深层富硒发酵制备了富硒蛋白多糖;进一步利用现代分离纯化技术,得到富硒多糖及其主要组分,并对其结构进行了分析;通过建立环磷酰胺所致的免疫抑制小鼠模型和H202诱导的RAW264.7细胞氧化损伤模型,研究了富硒多糖的免疫调节功能和抗氧化活性及其作用机制。其主要研究结果如下: 1.产多糖耐硒菌种的驯化和鉴定 通过平板划线法和浓度梯度法对产多糖菌种进行了耐硒驯化,得到产多糖耐硒菌种Z0206,并运用形态学、生理生化特征和16S rDNA基因序列分析相结合的方法对其进行了鉴定。鉴定结果表明,产多糖耐硒菌种Z0206属于E.cloacae。将测序获得的16S rDNA基因序列登录GenBank,获得登录号为EU647232,并与其相似性较高的序列构建了系统发育树。 2. E.cloacaeZ0206富硒多糖的制备 通过发酵培养基和发酵条件的优化得到E.cloacae Z0206富硒蛋白多糖的发酵条件:采用PDA加富培养基,接种量2%,培养温度30℃,pH值7.0,转速200 rpm,培养第6h加硒,加硒浓度20μg/mL,发酵时间48h,起始葡萄糖浓度2%,第24h流加2%葡萄糖;利用优化的发酵条件进行深层富硒发酵,发酵液通过蒸发浓缩、离心、乙醇沉淀等制备得到了富硒蛋白多糖(SPPS):产量为26.7g/L,含硒量为65.7mg/kg;进一步经Sevag结合酶法脱蛋白、H2O2脱色、透析等处理纯化得到富硒多糖(SPS)。 3. E.cloacae Z0206富硒多糖的结构分析 将纯化得到的富硒多糖SPS经离子交换柱层析(DEAE-52)和分离型凝胶柱层析(Sephadex G-100)分离纯化得到两个组分,其中组分1(SPS-1)占76%,采用液相色谱、红外光谱、核磁共振等对SPS-1的结构进行初步分析。结果表明,SPS-1是由葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成的均一性杂多糖,摩尔比为8.530:0.061:0.706,分子量为23.9KD,分散系数为1.3;存在吡喃糖环构型和α、β糖甙键构型,并具有三股螺旋结构,具有较长的侧链和较多的分枝,SPS-1平均粒径为47.49nm,表面电荷为11.9mV,脱水温度85.98℃,气化温度为256.57℃。 4.E.cloacae Z0206富硒多糖的免疫调节功能研究 本试验通过建立坏磷酰胺所致的ICR小鼠免疫低下模型,研究了细菌E.cloacae Z0206富硒多糖对免疫低下小鼠的免疫调节作用及其作用机制。结果表明,与空白对照组相比,环磷酰胺(50mg/kg.B.W)对免疫器官重、部分细胞和体液免疫指标具有显著的抑制作用(p0.05),即建模成功:与环磷酰胺作用组相比,200 mg/kg和400 mg/kg的富硒蛋白多糖(SPPS),400 mg/kg的富硒多糖(SPS)和多糖(PS)均显著提高了脾脏和胸腺指数(p0.05),缓解环磷酰胺引起的脾脏和胸腺萎缩,显著提高了ConA和LPS诱导的脾脏T、B淋巴细胞增殖(p0.05)和细胞因子(IL-2、TNF-α)的mRNA水平(p0.05);与环磷酰胺作用组相比,400 mg/kg的SPPS和SPS预防性灌胃后,血清和细胞培养液中IL-2和TNF-α水平显著升高(p0.05),400 mg/kg的PS和200 mg/kg的SPPS提高了血清中TNF-α水平、培养液中IL-2和TNF-α的水平(p0.05);400mg/kg的SPPS、SPS和PS预防组的CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞活性均显著高于环磷酰胺组(p0.05),CD8+细胞活性显著低于环磷酰胺组(p0.05),其中400mg/kg的SPPS组使其恢复到正常水平;200 mg/kg的SPPS,400 mg/kg的SPPS、SPS和PS显著提高了免疫低下小鼠血清溶血素水平(p0.05)和抗体形成细胞数(p0.05),其中经400mg/kg的SPPS灌胃预防均可使血清溶血素半数溶血值和抗体形成细胞数目恢复到正常水平。从其作用效果来看:富硒蛋白多糖富硒多糖多糖。提示:富硒多糖可通过调节细胞免疫和体液免疫,而发挥的免疫调节作用;硒、蛋白和多糖三组分在发挥免疫调节作用方面可能具有较强的协同作用。 5. E.cloacae Z0206富硒多糖的抗氧化活性研究 本试验通过建立H2O2诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞氧化损伤模型,研究了细菌E.cloacae Z0206富硒多糖对RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。结果表明,与对照组相比,H2O2显著降低RAW264.7细胞的存活率(p0.05):与H2O2单独作用组相比,200μg/ml和400μg/ml的富硒蛋白多糖(SPPS),400μg/ml的富硒多糖(SPS)和多糖(PS)显著提高了SOD和GSH-Px活性,抑制ROS、MDA的产生和LDH的释放,维持细胞线粒体膜的完整性,抑制跨膜电位的耗散、Caspase-3的活化和DNA的降解(p0.05):与H2O2单独处理组相比,不同浓度的(200μg/ml和400μg/ml)的SPPS和SPS,400μg/ml的PS显著提高了Bcl-2基因的mRNA水平(p0.05),降低了Bax基因的mRNA表达水平(p0.05);与H2O2单独处理组相比,SPPS (200μg/ml)和SPS(400μg/ml)显著增加了Bcl-2基因的蛋白表达水平和Bcl-2/Bax(p0.05),降低了Bax基因的蛋白表达水平,PS (400μg/ml)显著提高了Bcl-2基因的蛋白表达水平(p0.05);与H2O2作用组相比,200μg/ml和400μg/ml的SPPS、SPS和PS均显著提高了血红素氧化酶(HO-1)的mRNA和蛋白表达水平。从抗氧化效果来看:富硒蛋白多糖富硒多糖多糖;对于SPPS,浓度过高,其抗氧化活性显著下降,而SPS和PS则表现出明显的量效关系。提示:富硒蛋白多糖和富硒多糖可能通过清除活性氧,提高抗氧化酶活性、诱导HO-1的表达以及抑制凋亡信号通路而对H2O2引起的RAW264.7细胞的氧化损伤实施保护作用,是一种有效的抗氧化剂;硒、蛋白和多糖三组分可能在发挥抗氧化功能方面具有较强的协同作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 关枫;王博祺;王莹;;狭叶荨麻精制多糖含量测定[J];中国药事;2011年09期
2 高路;张公信;高云涛;;余甘子多糖提取物抗氧化活性研究[J];中国农学通报;2011年20期
3 刘涛;尼玛卓玛;尼珍;陈蓉;;苯酚-浓硫酸法测定西藏天麻中多糖含量的条件优化[J];广东农业科学;2011年08期
4 赵汉民;许海峰;梁超颖;;溪黄草多糖含量的测定[J];广西民族师范学院学报;2011年03期
5 徐广侠;;苯酚—硫酸法测定党参提取物中多糖的含量[J];中国中医药现代远程教育;2011年15期
6 安明显;孙雪;孙文鹏;胡志凤;薛勇;颜玉;;752型紫外分光光度计测定长白山草苁蓉中多糖研究[J];科技信息;2011年15期
7 刘艳;田吉;何兵;肖顺汉;;四川楤木根茎叶嫩芽中多糖含量的紫外分光光度法测定[J];时珍国医国药;2011年07期
8 王超;张曜武;;改良-差示酚硫法的建立及对淫羊藿多糖的含量测定[J];西北药学杂志;2011年04期
9 陈虹;张志敏;张大鹏;武志娟;夏鑫华;范萍;杨辉;陈康;;全真一气汤多糖的提取和多糖中总糖的含量测定[J];临床医学工程;2011年06期
10 曹佳佳;徐永群;陈小康;;荧光光谱法测定灵芝中多糖含量[J];光谱实验室;2011年04期
11 徐丽媛;李志猛;杨蕾;吕永磊;王丹;李向日;;菟丝子多糖含量测定方法的研究[J];北京中医药大学学报;2011年08期
12 嘎鲁;爱军;;苯酚-硫酸显色法测定蒙药沙蓬中的多糖含量[J];中国民族医药杂志;2010年11期
13 关力;杨晶;李楠;;杏鲍菇子实体多糖的提取和纯化工艺研究[J];黑龙江医药;2011年03期
14 宋健;包华音;王颖;石俊英;;桔梗生长年限和采收期与质量的相关性研究[J];齐鲁药事;2011年06期
15 邓芬;张芳芹;王烨;雷迎;刘存芳;赖普辉;;厚朴叶子中多糖的超声法提取及抗氧化活性研究[J];食品科技;2011年08期
16 蒋蕊;考书娟;徐小娟;徐德武;;槲皮素对免疫低下小鼠体液免疫功能的影响[J];青岛农业大学学报(自然科学版);2011年02期
17 明兴加;王娟;王海军;李标;张明;;齿瓣石斛不同营养器官多糖的含量测定[J];重庆中草药研究;2011年01期
18 王晋;罗素琴;王来兵;于姝燕;孙正武;张硕;;阿尔泰狗娃花根部多糖含量的测定[J];内蒙古医学院学报;2011年03期
19 李南薇;刘长海;陆映机;;狗肝菜功能性成分的抗氧化活性[J];食品科学;2011年13期
20 王和才;杨巍;王刚;钱菊根;;微波辅助提取紫薯茎叶多糖的研究[J];食品科技;2011年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐娟;李飞;;淫羊藿多糖的研究进展[A];中华中医药学会中药炮制分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
2 崔方;封士兰;;柱前衍生化高效液相色谱法分析甘肃特色中药材中多糖的单糖组成及含量测定[A];甘肃省化学会二十六届年会暨第八届中学化学教学经验交流会论文集[C];2009年
3 杨云;贺海花;冯卫生;;不同蒸制方法和时间对黄精中多糖含量的影响[A];药用植物化学与中药资源可持续发展学术研讨会论文集(上)[C];2009年
4 汪开治;;12种重要工业用制浆软材中的多糖含量和组成[A];2006浙江林业科技论坛论文集[C];2006年
5 臧恒昌;孙春晓;;近红外光谱分析技术用于糖胺聚糖分析的展望[A];中国药学会全国多糖类药物研究与应用研讨会论文集[C];2008年
6 汲晨锋;郭守东;季宇彬;;野西瓜成熟果实中多糖的含量测定及高效毛细管电泳分析研究[A];中药化学研究与药物创新——中华中医药学会中药化学分会2006年度学术研讨会论文集[C];2006年
7 龚力民;刘塔斯;任守利;夏国威;;雪莲果根多糖的含量测定研究[A];中华中医药学会第九届中药鉴定学术会议论文集——祝贺中华中医药学会中药鉴定分会成立二十周年[C];2008年
8 张振凌;王昭;冯晟楠;;酒炙对川牛膝中多糖含量的影响[A];中华中医药学会中药炮制分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
9 乐巍;邱蓉丽;季龙;;不同采收期茶枝柑果皮中总挥发油、黄酮、生物碱及多糖含量分析[A];全国第9届天然药物资源学术研讨会论文集[C];2010年
10 陈建伟;陈爱萍;郑泉;;红栓菌深层培养物中多糖的含量测定[A];首届药用真菌产业发展暨学术研讨会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐春兰;Enterobacter cloacae Z0206富硒多糖的制备、结构分析及其主要生物学功能研究[D];浙江大学;2008年
2 宋雨鸿;丹参多糖抗小鼠免疫性肝损伤及其免疫调节机制的研究[D];南方医科大学;2010年
3 杨宁;仙人掌多糖的分离纯化及降血糖的研究[D];华南理工大学;2007年
4 刘彦威;冬虫夏草无性型培养与鉴定及其抗肿瘤机制的研究[D];中国农业大学;2005年
5 常秀莲;两种芦荟活性成份及其热稳定性比较研究[D];大连理工大学;2006年
6 陈宏伟;蛹拟青霉对三种重要微量元素的有机转化及有机转化物的功能研究[D];安徽农业大学;2010年
7 李莉;新疆黑加仑生物活性有效部位的提取及其功效学研究[D];新疆医科大学;2008年
8 罗立新;灵芝菌深层培养及灵芝多糖分离纯化的研究[D];华南理工大学;1996年
9 魏明;霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长和多糖合成的动力学研究[D];合肥工业大学;2007年
10 杨宝;荔枝壳功能性成分制备与生理活性研究[D];华南理工大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 戴永强;中药复方免疫增强剂中活性多糖的分离纯化研究[D];石河子大学;2006年
2 刘芳;冬凌草多糖的提取纯化及免疫活性初探[D];天津医科大学;2008年
3 李斌;乌骨藤多糖活性成分的研究[D];辽宁中医药大学;2010年
4 姜殿强;岩溶生态环境条件下石生和树生铁皮石斛生长的对比研究[D];广西师范大学;2007年
5 白凤霞;螺旋藻变异株生物活性物质的研究[D];南京林业大学;2008年
6 李蔚;液体深层发酵羊肚菌水溶性多糖的提取分离纯化分析[D];新疆农业大学;2008年
7 傅立雯;福建短葶山麦冬质量标准及其提取工艺研究[D];福建农林大学;2008年
8 孙惠洁;红毛藻多糖的提取纯化及其性质的研究[D];集美大学;2008年
9 王连峰;阿魏菇多糖高产菌株的复合诱变选育[D];新疆大学;2009年
10 王志忠;螺旋藻多糖提取新工艺的研究及其多糖的分离纯化[D];内蒙古农业大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李标 唐坤 舒坤贤;声波刺激可提高铁皮石斛组培苗多糖含量[N];中国医药报;2006年
2 谢云挺 俞平;“救命仙草”可工厂化生产[N];新华每日电讯;2003年
3 高玉平;灵芝种质资源的收集与评价技术[N];科技日报;2006年
4 赵茂华;如何鉴别黄芪多糖原粉[N];中国畜牧兽医报;2008年
5 彭会安;美罗国际 高擎真菌多糖生物科技创新发展大旗[N];中国高新技术产业导报;2007年
6 王迎;宁夏枸杞更补人[N];医药养生保健报;2008年
7 本报记者  王蔚佳;铁皮石斛神话如何延续[N];中国医药报;2006年
8 兰卫;微波技术提高玫瑰红景天提取效率[N];中国医药报;2005年
9 记者 何潭振;浙江职能部门全方位为消费者保驾护航[N];中国食品质量报;2006年
10 记者 施仁潮;铁皮石斛组培将实现工厂化生产[N];中国中医药报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978