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假丝酵母产脂肪酶固定化研究

闻臻臻  
【摘要】:脂肪酶目前是世界第三大工业酶,由于酶的来源不同,其最适载体和最佳固定化方法都有其特异性。优良载体的选择和理想的固定化方法始终是国内外研究的热点。在本实验从一株高产脂肪酶的假丝酵母菌种出发,首先对发酵条件做了调整,提高了发酵时的通气量,使脂肪酶产量提高了约10%,发酵液的品质也得到了很大的提高,有利于下游分离纯化的操作。 分离纯化过程中经过反复实践,得出了一种很好的方法,即将发酶液直接经大孔树脂和DEAE-琼脂糖离子交换树脂两步层析,酶活收率可达86.5%。而且,操作简单、操作周期短、成本低。 分别以壳聚糖和氨基化后的硅胶作为固定化载体,用戊二醛作为交联剂,将脂肪酶共价固定化于载体上,壳聚糖的最佳固定化条件是戊二醛浓度2.5%,给酶量为4125U/g;氨基化硅胶的最佳固定化条件为戊二醛浓度2%,最佳给酶量在3456U/g,固定化酶活为2952U/g,最佳酶活表现率为85%。两种方法所得的固定化酶的耐温性和储藏稳定性都有了显著提高,可耐50℃高湿1小时(加游离酶数据),氨基化硅胶固定化酶在50℃下保温3小时后仍保留有14%的酶活。(两载体的比较数据)结果显示假丝酵母产脂肪酶固定于弱亲水性载体上要比固定于强亲水性载体上效果更好。


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