收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

家蚕HMGA蛋白的原核表达与功能研究

赵燕  
【摘要】: HMGA(High Mobility GroupA)蛋白是一类位于染色体上的非组蛋白,所有的HMGA蛋白都含有九个高度保守的氨基酸序列和一个带负电荷的酸性C端。前者称为AT-钩,与富含AT的DNA小沟相结合。目前,对于HMGA的研究很多,但是有关HMGA在家蚕中研究仅限于在卵泡成熟中的作用。 我们从NCBI基因库中搜索到命名为HMGA的家蚕基因,通过BLAST比对,确认为家蚕基因,分析其编码的蛋白质序列,发现具备HMGA保守的序列,故命名为BmHMGA (Bombyx mori HMGA), GenBankNo.DQ402512。BmHMGA基因只含有一个外显子,cDNA全长1205bp,ORF大小为345 bp,编码114个氨基酸残基。预测分子量为12.24 kD,等电点为9.58。 我们根据ORF序列特征设计上下游引物,以本实验保存的家蚕蛹cDNA为模板,PCR扩增出与理论值相符的目的片段,插入融合表达载体pET-28a(+),成功构建重组表达质粒并转化大肠杆菌BL21star (DE3)感受态细胞,经PCR、酶切鉴定以及测序分析证实重组正确。以终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导,裂解菌体进行SDS-PAGE分析,在22 kD附近有特异性蛋白条带,后经质谱检测,确定为融合蛋白。通过Ni-NTA柱亲和层析成功得到纯化的融合蛋白,用该融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA检测效价在1:12800以上。提取家蚕各时期及组织的RNA,设计特异引物利用RT-PCR检测BmHMGA在转录水平上差异。结果表明:在各时期中,基因BmHMGA在卵的转录水平最高。家蚕五龄幼虫中,BmHMGA基因在头中的转录水平明显高于其他的组织;提取家蚕四个时期及五龄幼虫的头、卵巢、丝腺等组织的总蛋白,进行免疫印迹实验,结果显示,在五龄幼虫的头中BmHGMA基因表达量明显高于其他组织,在中肠,马氏管中没有检测到明显的信号,和RT-PCR的实验结果相一致。BmHMGA蛋白在家蚕四个时期均检测到表达信号,但差异很大,卵中信号最明显,蛾中最弱。ELISA半定量分析结果与RT-PCR和Western blotting结果相同。以家蚕BmN细胞进行免疫细胞化学实验,结果显示,BmHMGA蛋白仅在细胞质当中有分布。这些结果为深入研究家蚕BmHMGA基因的功能奠定了基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 潘国庆,李艳红,谢俪,庞敏,潘敏慧,鲁成,周泽扬;家蚕微孢子虫侵染家蚕胚胎细胞与草地贪夜蛾细胞的病变比较[J];重庆师范大学学报(自然科学版);2005年03期
2 王林玲;陈克平;姚勤;王永杰;代璐;;家蚕基因工程载体研究新进展[J];安徽农业科学;2006年03期
3 钟伯雄,陈金娥,颜新培,徐孟奎,梁建设;家蚕催青后期胚胎蛋白质双向电泳图谱分析[J];昆虫学报;2005年04期
4 陈鹏;童晓玲;代方银;鲁成;;家蚕Hox基因研究进展[J];昆虫学报;2010年06期
5 范兰芬;钟杨生;林健荣;;家蚕细胞周期蛋白基因BmCcnl1的克隆及表达分析[J];昆虫学报;2010年12期
6 柴春利;鲁成;;从形态学不同到基因水平差异:家蚕与果蝇早期胚胎发育比较[J];遗传;2006年09期
7 王娜;杜希宽;蒋明星;张传溪;程家安;;家蚕BmN细胞中8种启动子的活性比较及利用hr5-IE1启动子实现EGFP的稳定表达[J];昆虫学报;2010年03期
8 潘敏慧;肖仕全;洪锡钧;鲁成;;家蚕胚胎细胞系BmE-SWU1的建立及其生物学特性[J];细胞生物学杂志;2005年06期
9 赵国力;陈克平;姚勤;郭忠建;;家蚕生殖细胞相关基因nanos的克隆表达及在胚胎发育中的表达模式[J];昆虫学报;2007年11期
10 田宗成;骞爱荣;续惠云;狄升蒙;张维瓮;媛媛;商澎;;家蚕动力蛋白轻链8基因克隆及其对重力的响应[J];生物化学与生物物理进展;2009年03期
11 田宗成;周博;骞爱荣;续惠云;刘佳;狄升蒙;张维;瓮媛媛;黄勇平;商澎;;家蚕胚胎期重力相关基因的抑制消减杂交分析[J];中国生物工程杂志;2008年11期
12 钟伯雄;家蚕胚胎发育时期的蛋白质变化及构造分析[J];遗传学报;1999年06期
13 吕顺霖,顾国达,徐俊良,松本继男,桥本义文;氟对家蚕胚胎培养细胞毒性的研究[J];蚕业科学;1993年04期
14 潘敏慧;冯振月;田志强;刘敏;鲁成;;家蚕胚胎细胞系的DNA指纹图谱分析[J];分子细胞生物学报;2006年06期
15 田宗成;骞爱荣;续惠云;狄升蒙;张维;瓮媛媛;黄勇平;商澎;;重离子辐射和模拟失重复合因素对家蚕胚胎发育期基因表达谱的影响[J];生物物理学报;2009年S1期
16 林健荣,严会超,钟生泉;家蚕胚胎期对高温干燥催青耐受性的遗传分析[J];遗传;2000年06期
17 陈卫平,李扬,王惠,曾毅;抗癌基因Rb在大肠杆菌中的表达[J];病毒学报;1994年01期
18 汪泽厚,潘进勇,唐明山,高明发,潘俊,曾毅,朱锡华;人可溶性CD59的原核表达及其生物学活性的初步研究[J];上海免疫学杂志;2000年03期
19 胡以平,姚玉成;TNF家族的新成员TRAIL cDNA的克隆及其在E.coli中的表达[J];癌变畸变突变;2000年02期
20 汪明,吴志光,复春;肉鸡IFN-alpha基因的克隆、序列分析以及在大肠杆菌中的表达[J];农业生物技术学报;2000年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李文学;刘刚;柴春利;鲁成;;家蚕mago nashi基因的克隆、序列分析及原核表达研究[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(1)[C];2009年
2 盛洁;贡成良;薛仁宇;谢敏;张晓荣;李艳梅;曹广力;;家蚕vasa样基因的初步研究[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(1)[C];2009年
3 季明明;鲁延军;甘丽萍;牛艳山;司马杨虎;徐世清;;家蚕BmColⅣ α1基因的结构特征与表达谱分析[A];中国蚕学会第六届家蚕和柞蚕遗传育种学术研讨会论文集[C];2009年
4 朱晓苏;宋艳;徐世清;;家蚕作为模式生物在现代生物学中的应用[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(3)[C];2009年
5 朱晓苏;宋艳;徐世清;;家蚕作为模式生物在现代生物学中的应用[A];中国蚕学会第六届家蚕和柞蚕遗传育种学术研讨会论文集[C];2009年
6 梁辉;王文栋;朱晓苏;陶卉;徐丽;司马杨虎;徐世清;;家蚕隐花色素基因Cry1与Cry2的表达谱与功能研究[A];2011年全国时间生物医学学术会议论文集[C];2011年
7 钱平;吴阳春;徐安英;鲁成;;家蚕dpp基因的克隆和表达研究[A];中国蚕学会第六届家蚕和柞蚕遗传育种学术研讨会论文集[C];2009年
8 鲁延军;季明明;孔令斐;张升祥;司马杨虎;徐世清;;基于网络数据库资源的家蚕BmCol Ⅳ α1基因克隆和分析[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(2)[C];2009年
9 潘敏慧;杜娟;张金叶;孙志亚;黄淑静;于子舒;鲁成;;家蚕Flap Endonuclease-1基因的克隆及功能研究[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(1)[C];2009年
10 范兰芬;钟杨生;林健荣;;SDS-PAGE与MALDI-TOF-MS质谱联用分析家蚕胚胎程序化发育差异蛋白[A];中国蚕学会第六届家蚕和柞蚕遗传育种学术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张金叶;家蚕凋亡相关基因BmDronc和BmBuffy的克隆鉴定及功能研究[D];西南大学;2011年
2 张升祥;家蚕气味结合蛋白基因的研究[D];山东农业大学;2009年
3 杨捷频;家蚕30K蛋白的结构功能及五龄血浆蛋白质组学研究[D];中国科学技术大学;2011年
4 张艳;家蚕30K蛋白的鉴定和功能研究[D];西南大学;2012年
5 魏玲;家蚕Sox基因的鉴定和功能研究[D];西南大学;2011年
6 姚慧鹏;家蚕中肠和培养细胞的蛋白质组学研究[D];浙江大学;2009年
7 郑小坚;家蚕类胰岛素基因BBX-B8的功能研究[D];苏州大学;2010年
8 梁九波;家蚕表皮蛋白基因的表达谱分析及表皮蛋白BmorCPT1的功能研究[D];西南大学;2012年
9 邓党军;家蚕脂肪体特异启动子BmLSP、BmLP3的克隆、鉴定及应用[D];西南大学;2011年
10 陈萍;家蚕苯丙氨酸羧化酶基因(BmPAH)和色氨酸羟化酶基因(BmTRH)克隆、表达及功能研究[D];西南大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵燕;家蚕HMGA蛋白的原核表达与功能研究[D];浙江理工大学;2010年
2 方婷;家蚕特有基因的鉴定、表达模式分析及功能初探[D];西南大学;2010年
3 孙志亚;家蚕Bmbuffy基因的克隆及其表达分析[D];西南大学;2010年
4 黄淑静;家蚕Bmcaspase-9基因的克隆及表达分析[D];西南大学;2010年
5 彭丽娜;家蚕BmDichaete基因的克隆及功能初探[D];西南大学;2012年
6 赵丹红;家蚕BmICE-912基因的克隆与功能研究[D];西南大学;2011年
7 张丹宇;家蚕bmo-miR-7靶基因Bmhairy的鉴定[D];西南大学;2010年
8 韩宇;家蚕酪氨酸羟化酶基因的表达与功能初探[D];西南大学;2010年
9 栗凤鹏;家蚕三磷酸腺苷结合盒转运子的鉴定及部分成员的克隆与功能分析[D];江苏科技大学;2011年
10 陈璐诗;家蚕三重半月纹突变(E~(Tc))的分子基础研究[D];西南大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 吴一福;我学者首次发现抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系[N];中国医药报;2006年
2 本报记者 伊洁 张颖;“挑战杯”的胜利者[N];福建日报;2005年
3 张晓鹏 何秀丽;哈兽研构建起“猪蓝耳病”预防控制平台[N];中国畜牧兽医报;2008年
4 宋冬 何玉玺;祖国的需要,就是我们最好的选择[N];科技日报;2009年
5 记者 张颖 伊洁;农林大学学生喜获“挑战杯”特等奖[N];福建日报;2005年
6 俞忠良;我国克隆出SARS病毒样颗粒[N];健康报;2003年
7 本报首席记者 任荃;一石三鸟“里葆多”[N];文汇报;2009年
8 张国民;还大家一个明白[N];中国医药报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978