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HSV-TK/hNIS基因共表达介导GCV/I-131联合治疗肝癌的研究

郭国英  
【摘要】:背景:与HSV-TK(单纯疱疹病毒胸苷激酶)/GCV(丙氧鸟苷)传统肿瘤自杀基因系统相比,人钠/碘转运体(hNIS)是近年来发现的新型治疗基因。然而,二者的疗效尚需进一步提高。本研究旨在探索hNIS介导的放射性核素体系与HSV-TK/GCV自杀基因体系对肝癌细胞的联合毒性作用。 方法:构建EF1-α启动子调控下的hNIS的表达载体与CMV启动子调控下的GFP和HSV-TK共表达载体,慢病毒包装后转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察重组肿瘤细胞HepG2/NTG荧光蛋白的表达;RT-PCR进一步检测目的基因hNIS和HSV-TK的表达情况;MTT检测GCV对HepG2/NTG的杀伤作用及旁观者效应;摄碘试验及流出试验评价HepG2/NTG对碘的摄取及滞留情况;最后通过克隆形成实验评价GCV和131I对HepG2/NTG的单独及联合杀伤作用。 结果:RT-PCR、荧光显像证实hNIS、HSV-TK、GFP基因在肝癌细胞中成功表达;与对照组相比,HepG2/NTG的摄碘高出76倍,20min摄碘率最高,其后表现出碘外流,有效半衰期不到10min,同时这种碘摄取能被NaClO4特异性抑制。HepG2/NTG对GCV或131I的毒性作用呈现剂量依赖性:50μg/mL GCV作用72h后,实验组细胞的存活率仅为33.98%±2.71%;放射性浓度为7.4MBq/mL的131I处理7h后,细胞的存活率仅为41.17%±0.72%;GCV和131I联合作用后,细胞的存活率仅为8.55%±1.22%,较单一药物作用细胞存活率下降了6倍。 结论:本课题在既往的研究成果的基础上,进一步通过hNIS/TK共转染介导GCV和131I两种相对成熟的肿瘤治疗模式实验性应用于肝细胞癌的治疗,评价131I/GCV对重组肿瘤细胞的联合杀伤作用,探索肿瘤治疗新模式——基因共转染介导放射化学联合治疗的可行性。研究结果提示,慢病毒介导hNIS/TK基因共转染介导肿瘤的放射化学治疗是可行的。


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