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铁皮石斛复方的抗氧化功能评价及网络药理学研究

李伯齐  
【摘要】:衰老是一种复杂的生命现象,是癌症、神经退行性疾病以及Ⅱ型糖尿病发展的基础。目前为止,还没有单一的理论能够全面解释衰老现象。自由基理论是被广泛接受的理论之一:自由基来源于线粒体以及环境,这种自由基的积累导致的生物大分子损害,从而使得衰老的发生。本研究中的铁皮石斛复方由铁皮石斛、黄芪、当归、枸杞、丹参、女贞子等常用中药在传统中医药理论指导下配伍而成。传统中医保健实践证明,这些中药具有延年益寿、强健体魄、改善精神萎靡的作用。现代研究表明,中草药含有的黄酮类、皂苷类物质、多糖类等有效成分具有调节生物进程、细胞通路、分子功能等途径,提升细胞内抗氧化能力,降低自由基对机体的伤害,从而延缓衰老。根据中药材及其有效成分的物理化学性质,选择不同的制备工艺对提取,并在此基础上,分别优化相应的提取工艺流程。按照本研究中优化后的提取工艺流程制备提取物,再将各味药材的提取物进行减压浓缩、冷冻干燥,分别制备得各味药材的配方颗粒。为了在理论上阐明铁皮石斛复方的抗衰老机理,通过TCMSP、YA-TCM以及文献中寻找铁皮石斛、黄芪、当归、丹参、女贞子六味药材中的化学成分,再根据ADME筛选有效成分,共得到138个有效成分。基于Swisstarget预测靶点,筛选共得靶点263个,根据他们与铁皮石斛复方中药物的关系,构建交互网络。分别构建预测药物靶点蛋白及疾病靶点互作网络,再将这两个互作网络合并取交集,获得蛋白-蛋白互作关系,构建PPI网络。对PPI进行拓扑结构值进行计算,再根据度、介数、紧密度对节点进行筛选,获得核心靶点。经过对铁皮石斛复方进行网络药理拓扑分析,我们得到关键化合物分别为槲皮素,木草犀素,山奈酚,β-谷甾醇,植物甾醇等,关键靶点分别为前列腺素-内过氧化物合酶,核受体共激活剂,肾上腺素受体2,钠电压门控通道α亚基5等。在铁皮石斛复方抗衰老机制的网络药理学理论基础上,通过动物实验对铁皮石斛复方进行抗氧化功能评价,实验采用D-半乳糖颈背部注射构建亚急性衰老模型,并按配方给药。实验结束后,测定小鼠血清、肝、脑的抗氧化指标,实验结果显示,血清中MDA浓度显著高于正常组,这表明本实验建立的衰老动物模型符合实验要求。通过对小鼠血清、脑组织和肝组织中MDA、SOD、GSH-Px与GSH进行测定,与模型组相比,结果显示,喂食铁皮石斛复方组小鼠机体内MDA都有不同程度的降低,SOD、GSH-Px、GSH水平增高。通过对小鼠体内ALT、AST酶活力的检测,给药组、模型组、给药组ALT、AST酶活力均无显著差异,说明铁皮石斛复方对小鼠肝功能无损害。HE染色表明,铁皮石斛复方可减少模型组小鼠炎症和脂肪变性的发生率以及严重程度。综上所述,铁皮石斛复方可提高衰老模型小鼠体内抗氧化能力,可能通过以上多种功效协同作用,从而达到延缓衰老的作用。


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