收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

稻曲病菌突变体库的构建及其HOG1基因的克隆和功能初步分析

丁正中  
【摘要】:稻曲病菌是水稻重要的致病真菌,引起的稻曲病是水稻上的重要穗部病害。研究表明,许多植物病原真菌的生长、发育及致病性都受到细胞信号转导途径的调控,其中MAPK (mitogen-activated protein kinase)信号转导途径是普遍存在的并有重要调控作用的信号转导途径。深入研究稻曲病菌发育、致病分子机理对于防治稻曲病有着重要意义。 本文建立了农杆菌介导的稻曲病菌转化技术,成功获得两个生长缺陷突变体T18和T39,从中鉴定和分析了T18的T-DNA插入标记的基因。本文还通过同源克隆的方法克隆了稻曲病菌HOG1基因,并对其功能进行初步的分析。主要结果如下: 1.应用实时荧光定量PCR技术,分析了18S核糖体RNA基因(18S rRNA)、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)、多聚泛素酶基因(ubiquitin)、p-肌动蛋白基因(β-actin)、α微管蛋白基因(α-tubulin)等5个基因的表达情况。经geNorm软件统计学分析处理,结果表明,当利用荧光定量PCR分析比较稻曲病菌基因表达差异时,可选择α-tubulin和β-actin作为内参基因。 2.通过优化各种转化条件,建立了根癌农杆菌介导稻曲病菌的高效遗传转化体系。本研究采用此转化体系构建了含有1000多个转化子的稻曲病菌T-DNA插入突变体库,为以后的稻曲病菌基因功能研究奠定了一定的基础。本研究通过形态观察筛选出2株变异较大的突变菌株T18和T39,这两个突变菌株在生长速度、产孢量、孢子萌发率等方面与野生型相比存在明显缺陷。另外,利用TAIL-PCR技术对T18侧翼序列进行扩增得到约1800bp右边界序列,比对和预测结果表明该插入为点为细胞色素c氧化酶V的启动子区域,但该基因的具体功能还需进一步的研究。 3.根据几种丝状真菌Hogl MAPK的保守氨基酸序列设计简并引物,从稻曲病菌中扩增出MAPK同源基因的部分片段,然后利用RACE法延伸该片段的侧翼序列,获得MAPK编码基因的全长序列,命名为UvHog1、序列分析表明,该基因编码358个氨基酸的多肽,推测分子量为40.98kDa,等电点为5.63。UvHog1含有MAPK保守的蛋白激酶激活域(TGY),序列与稻瘟病MgOsm1(AAF09475.1)、球孢白僵菌BbHog1(AAS77871.1)、烟曲霉AfOsm1(XP752664.1)和隐球酵母CrHog1(AAM26267.1)等Hog1MAPK高度同源,相似性分别为95%、93%、88%和81%。系统聚类结果表明,UvHog1与酵母Hog1MAPK同源。 4.盐处理实验表明,低浓度和高浓度的渗透压胁迫下UvHog1的相对表达情况一致,都表现为先减小后增加,且在低浓度下UvHog1的相对表达量要比高浓度的处理要高。本实验还建立了稻曲病菌原生质体制备的体系,构建了稻曲病菌HOG1基因敲除质粒,为后续进一步研究UvHOGl基因的功能奠定了基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 高峻;稻曲病菌的毒性试验[J];江西农业科技;1983年10期
2 王永强;樊荣辉;刘兵;李绍慧;郑大伟;张敬泽;胡东维;;中国不同地理来源稻曲病菌rDNA-IGS的初步分析[J];植物病理学报;2010年02期
3 杨林;;稻曲病的发生及防治[J];耕作与栽培;1992年01期
4 王疏,白元俊,刘晓舟,朱茂山,郭晓波,姜克平;稻曲病接种菌源及接种方法的研究[J];辽宁农业科学;1996年01期
5 王永强;樊荣辉;刘兵;张敬泽;胡东维;;中国不同地理来源稻曲病菌rDNA-ITS的分析[J];植物保护学报;2009年05期
6 王广炳;张本山;张利华;;稻曲病的识别及防治技术[J];科学种养;2009年02期
7 王茂才;;稻曲病发生与防治的初步研究[J];江西植保;1985年03期
8 程明渊,刘洪涛,阎万元,孙永吉,胡莹,韩润亭;人工培养条件下稻曲病菌厚垣孢子产生因素初探[J];吉林农业科学;1996年02期
9 王疏,白元俊,刘晓舟,褚茗莉,朱茂山,石守荣,张海楼;稻曲病菌白化菌株研究初报[J];辽宁农业科学;1996年06期
10 王疏,白元俊,周永力,姚健民,白金铠;稻曲病菌的病原学[J];植物病理学报;1998年01期
11 ;稻曲病菌(Ustilaginoidea virens(Cke.)Tak.)的一个转主寄主[J];北方水稻;1986年06期
12 王疏;杜毅;褚茗莉;白元俊;邵雪;鲁守平;;稻曲病菌孢子形成的培养技术及人工接种研究[J];辽宁农业科学;1992年05期
13 潘勋;;稻曲病病源及对水稻产量的影响[J];河北农业科学;1993年01期
14 滕新民;李学良;;稻曲病[J];农业科技通讯;1982年08期
15 杜毅;褚茗莉;王疏;徐慧民;白元俊;邵雪;;稻曲病发生规律与栽培防治研究初报[J];辽宁农业科学;1990年06期
16 廉洪喜;;稻曲病发生原因及综合防治措施[J];现代农村科技;2010年10期
17 于华光;;稻曲病饲料中毒及预防[J];饲料研究;1985年07期
18 严位中;王永华;钱均端;;稻曲病菌核的初步研究[J];云南农业大学学报;1993年03期
19 张君成,张炳欣,陈志谊,刘永锋,陆凡;稻曲病菌分生孢子的生物学研究[J];植物病理学报;2003年01期
20 李茹;赵桂东;周平;;稻曲病的发生及防治[J];上海农业科技;2008年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 胡茂林;黄晓东;李健强;;杀菌剂对稻曲病菌的抑制作用研究[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
2 吕博;杨丹;贾切;罗汉钢;黄俊斌;;基于PCR技术的稻曲病菌侵染特性研究[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
3 郑大伟;何黎平;孟春梅;胡东维;;稻曲病菌在水稻萌发期侵染的细胞学证据[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
4 金素心;钱强;代光辉;;两种植物提取物对水稻稻曲病菌抑菌活性研究[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
5 张震;杜新法;柴荣耀;毛雪琴;邱海萍;王艳丽;王教瑜;孙国昌;;对稻曲病菌T-DNA插入突变体若干生物学性状的分析[A];2005年华东植物病理学术研讨会论文集[C];2005年
6 张震;杜新法;柴荣耀;毛雪琴;邱海萍;王艳丽;王教瑜;孙国昌;;根癌农杆菌介导遗传转化稻曲病菌[A];2005年华东植物病理学术研讨会论文集[C];2005年
7 张舒;常向前;陈其志;吕亮;杨小林;喻大昭;黄俊斌;李阳;罗汉刚;张求东;王利兵;史艳云;;湖北省稻曲病菌Usitilaginoidea vriens遗传多样性的初步分析[A];植物保护与现代农业——中国植物保护学会2007年学术年会论文集[C];2007年
8 马慧;刘培斌;;水稻抗稻曲病突变体筛选[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
9 张君成;王忠文;廖咏梅;蓝绍明;刘洪涛;;糖对稻曲病菌薄壁分生孢子萌发的影响[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
10 陈志谊;张君成;刘永峰;刘邮洲;;水稻稻曲病人工接种技术研究[A];2005年华东植物病理学术研讨会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 胡茂林;稻曲病菌侵染水稻的行为研究[D];中国农业大学;2014年
2 谭小平;水稻品种抗稻曲病评价及稻曲病菌遗传多样性研究[D];湖南农业大学;2008年
3 程敬丽;源自内生真菌的倍半萜类新颖高效抑菌化合物的衍生合成与生物活性研究[D];浙江大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 康姝;中国稻曲病菌群体遗传多样性研究[D];中国科学技术大学;2011年
2 金菊;稻曲病菌人工接种与水稻抗病性评价研究[D];浙江大学;2012年
3 李燕;稻曲病菌生物学特性与致病力及遗传多样性的研究[D];南京农业大学;2011年
4 陈曜;稻曲病菌的生物学、侵染特性与防治[D];福建农林大学;2013年
5 蒋旭翔;稻曲病菌致病力分化及环境因子对稻曲病的影响[D];华中农业大学;2014年
6 郑静;水稻稻曲病流行危害分析及稻曲病菌孢子田间释放规律研究[D];浙江师范大学;2012年
7 唐艳霞;稻曲病菌侵染机制的细胞学研究[D];浙江大学;2013年
8 陈美军;稻曲病菌毒素活性及致病性细胞化学研究[D];浙江大学;2004年
9 陈莎;光合细菌cs-1对稻曲病菌拮抗活性的测定[D];中南大学;2012年
10 丁正中;稻曲病菌突变体库的构建及其HOG1基因的克隆和功能初步分析[D];浙江师范大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 刘子龙;走出稻曲病防治误区[N];云南科技报;2006年
2 刘子龙;走出中稻稻曲病防治误区[N];四川科技报;2006年
3 城固县农技中心 郭清平 许启荣 王春玉;水稻稻曲病的防治[N];陕西科技报;2006年
4 记者刘志强 通讯员罗艳;贵州180万亩水稻感染稻曲病[N];科技日报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978