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桑叶黄酮类化合物提取、分离鉴定及其抗氧化活性的研究

俞坚  
【摘要】: 本文以桑叶黄酮类化合物提取、分离纯化为目的,运用超高压提取和微波辅助提取等提取手段,实现桑叶黄酮类化合物的最大化利用。在整理大量文献和实验研究的基础上,探讨提取、分离、纯化较优的技术工艺条件。借助UV、IR、ESI-MS、~1H-NMR、~(13)C-NMR等现代仪器对桑叶黄酮类化合物进行了分析和鉴定。 1.桑叶黄酮类化合物的含量测定 运用RP-HPLC法,确立在Hypersil ODS2(4.6×250mm,5μm)柱上,以甲醇—0.5%磷酸为流动相,流速0.8 mL/min,358 nm下梯度洗脱30 min完成分析。该方法简单,快速,准确,精密度、稳定性较好。用此方法测得桑叶黄酮类化合物的含量为25.30 mg╱g。 2.桑叶黄酮类化合物提取 超高压提取桑叶黄酮类化合物实验结果表明:影响超高压提取的因素依次为提取压力、时间、料液比。优选方案:提取溶剂为70%乙醇,料液比1:20,提取压力500 MPa,提取时间6 min,桑叶黄酮类化合物提取得率达24.0 mg╱g。 微波辅助提取桑叶黄酮类化合物实验结果表明:影响微波辅助提取的因素依次为提取时间、功率、温度。优选方案:提取溶剂为70%乙醇,料液比1:20,提取功率600 W,提取时间15 min,提取温度70℃,桑叶黄酮类化合物提取得率达22.8 mg/g。 超高压提取或微波辅助提取后,桑叶样品颗粒表面孔隙明显变多、变大,其表面组织也变得更为疏松,比表面积增大。超高压提取和微波辅助提取桑叶黄酮类化合物提取率分别能达到94.9%和90.1%,要远远高于室温浸渍提取的62.5%;提取时间分别仅为6 min和15 min,比室温浸渍提取的24 h要远远的缩短了。 3.桑叶黄酮类化合物分离及其鉴定 分离并鉴定了桑叶中五个黄酮类化合物的结构,其中黄酮苷三个,黄酮苷元二个。分别是:Rutin、Isoquercitrin、Astragalin、Morin和Kaempferol。其中Morin在黑桑(Morus nigra L.)的根、茎、叶和白桑(Morus alba L.)的根皮中微量存在,从白桑叶子中为首次分离得到。 4.桑叶黄酮类化合物抗氧化活性 研究发现桑叶黄酮类化合物具有较强的抗氧化能力,且皆强于人工合成的常用食品抗氧化剂(BHT)。应用清除DPPH自由基方法评价揭示了桑叶中不同黄酮类化合物单体抗氧化能力大小依次为:Kaempferol≈Morin>Isoquercitrin>Astragalin>Rutin


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