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转基因大豆及其制品检测技术的研究

余春燕  
【摘要】: 转基因大豆及其制品日益增多,已经直接或间接地影响到人们的生活。也正因如此,转基因大豆及其制品对人体健康及生态环境的影响引起人们的广泛关注。为满足消费者选择权和知情权以及出于国际贸易的需要,转基因食品的检测手段也越来越引起各国政府和有关食品监督机构的重视。随着各国有关转基因标签法的建立和不断完善,对食品中的转基因成分含量的下限已有所规定,而且阈值越来越低。这就要求各国不仅能使定性检测技术日趋简捷和准确,更要求能探索出更加适合检测需要的定量手段。 基于目前国际上对转基因食品还没有建立统一完善的定性和定量检测体系,为了探索建立转基因检测体系的策略,本研究以抗草甘膦转基因大豆及其加工产品为材料,试图建立经济灵敏、准确可靠的转基因大豆及其制品的内外源基因检测体系。本研究主要取得了以下结果: 1、建立了以CTAB法为基础的转基因大豆及其粗加工和深加工产品抽提基因组DNA的技术。其结果显示:利用传统CTAB法对大豆种子抽提的基因组DNA基本完整,能完全满足PCR扩增要求;对粗加工产品(豆粕,豆奶粉)而言,延长CTAB法中抽提缓冲液的抽提时间为40~60min能得到基本完整的DNA;而对于深加工制品色拉油而言,在此基础上还需增加前处理阶段,即将样品适量溶解于TE缓冲液并充分混匀搅拌;此外对于酱油而言,抽提前用100mmoL/L的Tris-HCl洗2~3次可在DNA溶出前去掉水溶性和部分脂溶性色素以及部分多糖。 2、设计合成检测转基因大豆内源基因Lectin、外源基因CaMV35S启动子、NOS终止子及抗除草剂基因EPSPS基因的特异性引物。应用优化的常规PCR方法,对大豆及其加工产品豆粕、豆奶粉、酱油、色拉油等进行了检测。所有样品均检测到内标基因Lectin,其中在大豆和豆粕、豆奶粉中用此法可检测到外源基因CaMV35S、NOS和EPSPS基因片段。 3、采用常规PCR技术在深加工产品色拉油、酱油样品中未检测出外源基因CaMV35S启动子和NOS终止子,故利用巢式PCR技术,设计两对引物,成功扩增出CaMV35S启动子的大小两段基因片段,分别为195bp和117bp。本研究建立的常规PCR方法检测的相对灵敏度可达到0.1%,完全满足国际检测的需求。 4、利用TaqMan~(?)探针法荧光定量PCR技术对转基因大豆及豆粕进行荧光定量PCR检测技术的研究,从内源Lectin基因的扩增情况表明TaqMan~(?)探针法荧光定量PCR技术重现性和灵敏度良好。 在此基础上本文对大豆和豆粕的CaMV35S启动子和EPSPS基因分别进行了定量检测。结果表明在对转基因大豆的检测中,由CaMV35S启动子和目的基因EPSPS标准曲线计算得出样品中转基因百分含量分别为3.02%和3.00%,两者相差0.02%;在转基因豆粕的检测中,由CaMV35S启动子和目的基因EPSPS标准曲线计算得出样品中转基因百分含量分别为3.48%和3.49%,两者相差0.01%;且R~2值都达到了0.99以上,可作为大豆和豆粕中转基因成分定量检测的供选方法。


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