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哺乳动物粪便DNA提取技术研究

赵健元  
【摘要】:以粪便为材料提取动物DNA进行保护遗传学和分子生态学研究的关键是能否提取到高质量的粪便DNA。自粪便DNA分析技术兴起后,国内外在这方面做出了巨大的成就,发展了多种粪便DNA提取方法,充分证实了粪便DNA分析的可行性。但仍存在以下问题:①各种提取方法通用性不好。在许多实验中存在扩增成功率在物种和个体之间的差异。这一直是阻碍粪便DNA提取技术推广的主要障碍。虽然专用粪便DNA提取试剂盒有着较好的通用性,但昂贵的价格限制了该试剂盒的广泛应用,因此构建一套效果好、通用性好、性价比高的粪便DNA提取方法,可以大大推进粪便DNA技术的推广。②对陈旧粪便DNA提取的研究还是空白。本文所指的陈旧粪便是保存超过2年以上的粪便样品。从陈旧粪便中提取DNA对于充分利用迁出或死亡动物的遗传信息,扩大分子粪便学技术的应用范围具有十分重要的作用。③对粪便最佳保存方法的摸索。保存方法合适与否对粪便DNA质量影响很大,有许多学者对各种保存方法的保存效果进行了比较研究,但结果并不一致甚至相互抵触,这种矛盾影响了研究者对保存方法的选择。间接地阻碍了粪便DNA技术的发展。④未考虑到与DNA提取相关环节对结果的影响。由于粪便材料的特殊性,它的提取结果受到多重因素的影响,如样品的采集、保存等等,忽视其中任何一个环节,都会给试验结果带来不利影响甚至导致试验失败。 本文以11种哺乳动物粪便为材料,分别构建了2种新的提取方法解决了问题①和②;以粪便DNA提取产物的浓度和纯度为指标,用正交分析对问题③和


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