收藏本站
收藏 | 论文排版

NK细胞活化受体CD226的表达及功能研究

葛葵葵  
【摘要】: 固有免疫系统作为机体抵御外来微生物抗原入侵的第一道防线,能直接迅速的活化并对入侵机体的病原体进行清除,在获得性免疫系统肩动之前发挥了重要的屏障作用。天然杀伤细胞(natural killer cells,NK)是固有免疫系统的重要组成部分,在机体防御感染和癌症的免疫应答中起着重要作用。NK细胞的活化受到活化性与抑制性受体的共同调控,由于识别机制的多样化,近年来,NK细胞表面活化性受体得到了人们的广泛关注。 CD226分子是NK细胞表面活化性受体,近年来研究发现,CD226在NK细胞的活化并杀伤肿瘤细胞等生物学过程中发挥了重要作用,并与多种疾病的发生密切相关。虽然CD226的功能得到了人们的广泛关注,但其分子识别与活化机制仍然不是非常清楚。 本实验中,我们构建了CD226的胞外不同的结构域蛋白,包括含有N端19-129氨基酸序列的IgV样结构域ECD1(extracellular domain 1),以及含有两个IgV样结构域ECD2(extracellular domain 2)(19-243aa)。通过对两个长度不同的结构域与肿瘤细胞表面配体蛋白的相互作用进行研究,发现CD226蛋白与其配体可能的作用位点与其在肿瘤识别杀伤中的作用机理;进一步通过抗体介导的活化与蛋白阻断实验,探讨了CD226分子在NK细胞活化中的作用机制。 通过上述研究,我们初步获得了结果如下: 1.构建载体并原核表达CD226分子胞外结构域ECD1与ECD2,重组蛋白经复性纯化后,蛋白纯度达到95%以上,经Western Blot鉴定,蛋白成功表达。成功构建表达CD226胞外段蛋白的真核表达载体,经过转染并筛选获得稳定高表达可溶性CD226的CHO-K1细胞系。 2.发现CD226分子在NK细胞对肿瘤细胞识别杀伤中发挥重要作用,并且CD226分子与配体的识别与结合主要是通过胞外N端第一个结构域ECD1。蛋白结合实验发现,CD226胞外结构域可以识别并结合肿瘤细胞表面配体,单独的ECD1蛋白即可有效与靶细胞结合。CD226胞外结构域重组蛋白的加入可以有效阻断NK细胞对肿瘤细胞的杀伤,进一步研究发现,重组蛋白对效应细胞与靶细胞生长与增殖没有明显的影响,重组蛋白对杀伤的阻断主要是通过阻断NK细胞与靶细胞的结合实现的,提示CD226在NK细胞对靶细胞的识别中可能发挥了粘附分子的作用。 3.除粘附作用外,CD226传递的活化信号对NK细胞的活化有着重要的影响。抗体刺激CD226分子活化后可以引起NK细胞表面活化分子CD69的表达升高,细胞因子(IFNγ)与杀伤颗粒(CD107a,Granzyme B)的表达都明显升高。重组蛋白可以有效阻断K562引起的NK细胞的活化,包括CD69与颗粒酶B的表达降低,ERK1/2的磷酸化程度也有一定程度的降低。 上述结果证明,CD226分子作为NK细胞表面活化性受体,其与配体识别的主要位点位于胞外第一个免疫球蛋白样结构域ECD1。CD226分子传递的活化信号参与NK细胞与靶细胞的粘附,细胞因子分泌以及杀伤等多种免疫学过程,ERK1/2分子可能参与了CD226活化信号的传递。 淋巴细胞表面膜蛋白受体与炎症损伤触发密切相关,对淋巴细胞表面膜受体的研究与膜蛋白谱的描绘对研究淋巴细胞功能,维持机体的免疫平衡有着重要意义。为了能够快速有效筛选淋巴细胞表面低丰度的膜蛋白进行功能研究,在进一步工作中,我们建立了一种构建膜蛋白cDNA文库方法,并将其应用于小鼠肝脏淋巴细胞膜蛋白的特异性高通量筛选。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张俊;钱亚云;龚卫娟;胡茂志;季明春;;利用流式细胞仪检测人外周血NK细胞毒性方法的建立[J];实用临床医药杂志;2006年07期
2 刘海波;凝集素样受体KLRE1抑制NK细胞的细胞毒性[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2004年03期
3 张赟;程光;韩卫宁;曹云新;金伯泉;;超抗原对NK细胞CD226分子表达与功能的调节[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年01期
4 张赟,程光,尤向辉,张红梅,任军,金伯泉;自体外周血造血干细胞移植后造血重建中CD226分子在NK细胞上表达的变化[J];标记免疫分析与临床;2005年03期
5 吴洪洲;李青;;脐血NK细胞的杀伤活性及其影响因素[J];山东医药;2011年11期
6 赵成艳;马荣;王忠利;马恩龙;王丽红;;非霍奇金淋巴瘤患者T细胞亚群、NK细胞检测的临床意义[J];中国免疫学杂志;2006年02期
7 朱雄增;李小秋;;解读2008年恶性淋巴瘤WHO分类——T细胞和NK细胞淋巴瘤[J];临床与实验病理学杂志;2010年04期
8 战淑彩;董全文;吕振宗;王先勇;;成人风疹患者的T细胞亚群和NK细胞水平研究[J];中国临床研究;2011年06期
9 毛学英,南庆贤,李莹辉,宋锦平,钟萍;酪蛋白酶解产物对小鼠自然杀伤细胞杀伤效应的影响[J];食品科学;2004年09期
10 袁军,吴军,解志杰,王锡华,王儒鹏,周丽娜;体外共刺激阻断模型中NK细胞功能抑制机制初探[J];贵阳医学院学报;2005年02期
11 郭晓明;陈阿梅;;杀伤细胞免疫球蛋白样受体[J];内蒙古医学院学报;2005年06期
12 张乐;罗志娟;;NK细胞与树突状细胞相互作用的分子机制研究进展[J];实用医院临床杂志;2009年06期
13 芮冬妹;高云芳;;甲型H1N1流感患者外周血NK细胞和T细胞亚群的变化情况分析[J];临床和实验医学杂志;2011年02期
14 杨晓鲲;郑峻松;张新;蒲晓允;;GITR抗体介导增强NK细胞杀伤活性的实验研究[J];重庆医学;2006年18期
15 刘晓云;熊正爱;李好山;;白介素-21基因转导人宫颈癌细胞产生T细胞和NK细胞依赖的抗肿瘤作用[J];第三军医大学学报;2010年08期
16 龚洪立;陶磊;周梁;;LAG-3分子在免疫系统的研究进展[J];复旦学报(医学版);2010年04期
17 孙乐栋,周再高,曾抗;流式细胞仪检测尖锐湿疣患者的T细胞亚群及NK细胞[J];广东医学;2001年02期
18 张惠荣,杨红,杨军,叶海燕;NK细胞和IL-2分泌细胞在新生儿脐血中的表达[J];中国免疫学杂志;2003年06期
19 国家SARS防治紧急科技行动北京组;传染性非典型肺炎患者外周血自然杀伤细胞数量及其表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体变化的研究[J];中华医学杂志;2004年04期
20 张赟,贾卫,韩卫宁,曹云新,金伯泉;CD226在NK细胞亚群上表达规律与功能关系的研究[J];中国免疫学杂志;2004年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 田志刚;;NK细胞新理论与新型生物治疗技术[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年
2 傅瑞全;韦鹏涯;王坤;杨贵彬;;免疫口服液对小鼠NK细胞活性的影响[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
3 傅瑞全;韦鹏涯;王坤;杨贵彬;;免疫口服液对小鼠NK细胞活性的影响[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
4 孙乐栋;周再高;曾抗;;流式细胞仪对梅毒患者的T细胞亚群及NK细胞检测[A];2001年中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2001年
5 孙乐栋;周再高;曾抗;;流式细胞仪对梅毒患者的T细胞亚群及NK细胞检测[A];2002中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2002年
6 王学美;富宏;刘庚信;;糖尿病中医辨证与T淋巴细胞亚群及NK细胞相关性的研究[A];第六次中国中西医结合糖尿病学术会议论文汇编[C];2002年
7 石永兵;沈华英;施晓松;宋楷;;2型糖尿病患者T淋巴细胞亚群及NK细胞变化及其临床意义[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
8 刘延方;陈胜梅;;葡萄糖酸锑钠增强NK细胞杀伤活性的研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
9 王春燕;郭坤元;姜振宇;;供者NK细胞在小鼠MHC半相合骨髓移植的作用[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
10 张瑞军;杨亮;魏海明;田志刚;;NK细胞参与γδT细胞对结核杆菌的特异免疫应答的调节[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 葛葵葵;NK细胞活化受体CD226的表达及功能研究[D];中国科学技术大学;2009年
2 贾卫;一种新的白细胞分化抗原CD226(PTA1)分子结构和功能关系的研究[D];第四军医大学;2001年
3 高晓宁;KIR基因表达调控机制及其对NK细胞功能的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年
4 王晓娟;ConA激活的CD4~+CD25~-T淋巴细胞对NK细胞功能调节的实验研究[D];第三军医大学;2009年
5 郑胜;血小板与纤维蛋白原协同保护肿瘤细胞的机制研究[D];东北师范大学;2009年
6 姜拥军;中国HIV/AIDS患者NK细胞及其相关表面标志物研究[D];中国医科大学;2004年
7 马赛;两种常用季铵盐型抗菌单体抗菌性能、细胞毒性的比较研究及其细胞毒性机理初探[D];第四军医大学;2012年
8 王春燕;供者NK细胞在小鼠MHC半相合骨髓移植的作用[D];第一军医大学;2004年
9 魏军;NK细胞在子痫前期血管内皮细胞损伤中作用[D];中国医科大学;2006年
10 叶晓卉;一个新的T细胞活化分子(CD226)与HIV感染/艾滋病的相关性研究[D];中国医科大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张合龙;卵泡液中NK细胞活化与IVF结局的关系[D];中国医科大学;2008年
2 张赟;PTA1(CD226)在NK细胞上的分布与功能的研究[D];第四军医大学;2001年
3 韩岩梅;新型NK细胞抑制性受体KLRL1的基因克隆与功能研究[D];第二军医大学;2004年
4 谢红卫;锰对作业人群免疫系统的影响及其机理探讨[D];南华大学;2005年
5 陈炎;卵巢上皮性癌患者外周血中T淋巴细胞亚群及NK细胞含量变化的研究[D];安徽医科大学;2007年
6 位兴辉;乙型肝炎病毒C蛋白对NK细胞功能影响的研究[D];南华大学;2008年
7 陈波;硒对K562细胞凋亡的影响及其抗肿瘤活性机制研究[D];青岛大学;2002年
8 牛德红;化疗对恶性肿瘤患者细胞免疫功能影响的研究[D];山东大学;2005年
9 万瑶;P物质与神经生长因子对正常人外周血中NK细胞杀伤活性的影响[D];中国医科大学;2006年
10 沈虹;T细胞亚群及Th_1/Th_2细胞因子的改变与恶性肿瘤患者免疫功能关系之探索[D];浙江大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 梁健 通讯员 段德正;肺癌治疗水平有望得到提高[N];江西日报;2010年
2 关歆;对注射器用活塞细胞毒性项目检测有关问题的建议[N];中国医药报;2011年
3 知陶 小涛;拒绝排斥 移植研究寻觅救世主[N];医药经济报;2002年
4 ;JN-2518寻求合作[N];医药经济报;2004年
5 上海第二医科大学仁济医院 袁静 孟秀玲 王平全;香菇多糖的抗肿瘤疗效[N];中国高新技术产业导报;2001年
6 本报记者 胡迎新;心理和癌症关系深[N];健康时报;2003年
7 陈国良 卯晓岚;人体免疫力与食用菌[N];中国食品质量报;2003年
8 石斌;殷惠军;孙方臻;甘黄注射液可抑制异种排斥反应[N];中国医药报;2004年
9 汪贵昌 施 杞 高益民;抗癌新药芪珍胶囊抗SARS的新发现[N];中国中医药报;2003年
10 吴珊珊 胡永峰;筛选出两种杀灭病毒功效的纳米材料[N];科技日报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978