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提取温度对霍山石斛多糖理化性质及肠道粘膜免疫活性的影响

王正明  
【摘要】:本论文以名贵中草药霍山石斛为材料,研究提取温度对多糖提取率、理化性质以及肠道粘膜免疫活性的影响,并对一种霍山石斛多糖均一组分进行荧光标记,研究其在肠道粘膜免疫系统中的分布。 利用热水浸提法,通过固定料液比(1:3,m/v)和提取时间(2h),改变提取温度(40℃、60℃、80℃和100℃)获得四种霍山石斛粗多糖,其提取率随着提取温度的升高而提高。HPLC分析显示,霍山石斛粗多糖中主要含有两组分子量分布的多糖。高分子量的多糖组分(HMW),其比例和分子量均随着提取温度的升高而降低,而低分子量的多糖组分(LMW)含量和分子量呈上升趋势。用DEAE-纤维素阴离子交换树脂对霍山石斛粗多糖进行分离,得到两种组分,其中盐洗组分(HPSS)全部为HMW多糖组分,主要由Glc、Gal、 Man和Rha构成,其单糖组成比例在不同提取温度时变化不大,单糖构型主要为β-型。水洗组分(HPSW)的主要成分是LMW多糖,主要由Glc构成,并可能含有少量的Gal、Ara和Man,单糖构型主要为仅-型。HMW多糖热稳定性较差,随着提取温度的升高而发生降解,而LMW多糖热稳定性较好,随着提取温度的升高其在粗多糖中所占比例逐渐增大。因此提取温度对霍山石斛多糖理化性质的影响主要体现在改变这两种不同性质组分的比例上。各实验温度提取的霍山石斛粗多糖均具有较强的肠道粘膜免疫活性,且随着提取温度的升高活性呈下降趋势。HPSS的活性强于粗多糖和HPSW,可能是因为HMW是主要活性成分,但高温作用导致其活性降低。 霍山石斛均一多糖HPS具有有效的肠道免疫活性,能够促进Peyer's结细胞条件培养基刺激的骨髓细胞的增殖。研究利用溴化氰活化法成功对HPS进行了荧光标记。结果表明荧光标记不会对HPS的肠道免疫活性产生显著影响,且不会产生细胞毒性。HPS可以进入肠道粘膜系统,并且可以与Peyer's结内某些细胞结合。


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