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山核桃饼粕抗氧化肽的制备与鉴定

慈傲特  
【摘要】:天然来源的抗氧化肽因为其在食品和医药领域中具备潜在的运用前景,受到很多研究者的关注。山核桃粕蛋白作为一种新型的优质蛋白质资源,具有很高营养价值,值得开发利用。本论文首先提取了山核桃粕蛋白,然后进行山核桃抗氧化肽的制备工艺、肽的分离纯化以及体内外抗氧化活性研究。1.以水解度和总抗氧化性为评价指标,通过单因素试验,响应面回归分析的方法研究了山核桃粕蛋白抗氧化肽的酶解工艺,采用Alcalase碱性蛋白酶为酶源,其最佳工艺为:温度58℃、时间3 h、酶浓度5700 U/g、p H 8.5。在此最优组合下,可得吸光度为0.276,总抗氧化值最高。2.采用膜过滤对制备的山核桃抗氧化肽粗品进行超滤分级,将山核桃抗氧化肽粗品按照分子量范围分为3KDa、3-5KDa、5-10KDa和10KDa四种山核桃抗氧化肽。对这四种肽的理化性质进行测定,山核桃蛋白酶解动力学模型为DH=3.3036ln[1+(5.8372E0/S0+0.1503)t],通过实验证明该模型可靠。不同组分的山核桃蛋白酶解物溶解性与p H有关,在等电点时溶解度最低,碱性条件下溶解度逐渐增大。并且随着山核桃多肽分子量的增大,山核桃粕酶解物的溶解性降低。山核桃蛋白水解后,持水性和持油性降低,最高组分的持水性为2.59 m L/g,持油性为1.77 m L/g。山核桃蛋白水解物的乳化性和乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性在测试的p H范围内有相似的变化,在等电点时最低,随着p H的增加其乳化性质和起泡性质均增加,碱性条件下有利于该酶解产物的加工,且四个组分没有明显差异。山核桃多肽的差示量热扫描结果表明,酶解后的多肽均对热有较好的抵抗作用。3.山核桃多肽酶解产物经过超滤分离后得到的3KDa组分有较强的体外抗氧化活性,因此将3KDa多肽对小鼠进行灌胃,实验证明该组分山核桃多肽具有较高的体内抗氧化活性,可以提高小鼠血清、肝脏和脾脏中的SOD、CAT和GSH-Px活力,降低氧化产物MDA的含量。并且呈现一定的浓度依赖关系。将该组分多肽经过DEAE-52阴离子交换柱分离纯化后,得到两个不同的组分B1和B2。其中B1的抗氧化活性高于B2。将得到的B1组分进一步通过葡聚糖凝胶G-50进一步纯化,得到两个分子量不同的组分C1和C2,其中分子量高的C1组分表现出较强的抗氧化活性。将C1组分通过反向高效液相质谱联用鉴定出抗氧化肽为:LAYLQYTDFETR。该新型抗氧化肽合成后其羟基自由基清除能力、DPPH自由基清除能力和ABTS自由基清除能力浓度为0.1mg/m L时分别为47.42%、56.25%和67.67%。


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