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鱼腥草多糖的结构表征和抗炎活性研究

胡晓波  
【摘要】:鱼腥草属于三白草科植物蕺菜,是药食同源植物,具有抗菌、止咳、消炎等功效,这与其多糖成分密切相关。本文采用化学分析方法(酸水解、羰基还原、甲基化反应)和仪器分析手段(UV、FT-IR、HPGPC、GC、GC-MS、NMR),表征鱼腥草多糖的结构,同时通过体外实验分析鱼腥草多糖的抗炎活性。研究结果主要如下:采用热水、0.05 mol/L EDTA-2Na溶液、0.2 mol/L氢氧化钠溶液、1 mol/L氢氧化钠溶液对鱼腥草进行顺序提取,得了四个多糖组分HBHP、CHHP、DAHP、CAHP。化学组成分析表明四个组分糖含量分别为66.4%、63.2%、60.6%、62.8%,糖醛酸含量分别为29.6%、22.6%、18.5%、11.6%。单糖组成结果表明HBHP和CHHP由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比分别为9.7:11.9:10.6:21.4和11.3:17.8:7.6:18.9,DAHP和CAHP由阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比分别为14.1:17.0:9.0:13.8和6.6:37.5:9.9:6.3。扫描电镜结果表明HBHP、CHHP、DAHP的比表面积较大。热重分析表明CAHP的热稳定性最好。采用DEAE Cellulose-52对HBHP进一步纯化得到均一多糖HBHP-3和HBHP-4,分子量分别为397.4 k Da、616.7 k Da,糖醛酸含量分别为20.9%、14.8%。单糖组成结果表明HBHP-3和HBHP-4中鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸的摩尔比分别为16.0:12.6:4.6:18.1:15.6和34.1:6.9:5.0:16.2:10.0。结构分析表明HBHP-3的主链由→2)-α-D-Rhap-(1→、→4)-α-D-Galp A-(1→、→4)-β-D-Galp-(1→组成,在→2)-α-D-Rhap-(1→的O-4位连有支链α-L-Araf-(1→、→5)-α-L-Araf-(1→、→4)-α-D-Glcp-(1→、→6)-β-D-Galp-(1→、β-D-Galp-(1→。HBHP-4的主链由→2)-α-D-Rhap-(1→、→4)-α-D-Galp A-(1→、→4)-β-D-Galp-(1→组成,在→2)-α-D-Rhap-(1→的O-4位连接支链α-L-Araf-(1→、→4)-α-D-Glcp-(1→、β-D-Galp-(1→。抗氧化活性研究表明,在测定的浓度范围内,鱼腥草多糖呈现较好抗氧化活性,其中HBHP的羟自由基和DPPH自由基清除活性最好,而DAHP的ABTS自由基清除活性和Fe~(2+)螯合能力最好。免疫调节分析表明四个组分均具有较好的免疫调节活性,并与多糖浓度呈现正相关,其中HBHP对巨噬细胞的活化效果最明显,显著提高了细胞吞噬作用。抗炎研究结果表明,在5-100μg/m L浓度范围内,HBHP-3和HBHP-4抑制NO的分泌、降低促炎因子的m RNA表达量,并呈现剂量依赖性,说明HBHP-3和HBHP-4对LPS诱导的细胞炎症反应具有明显的抑制效果。Western-blot分析表明HBHP-3通过抑制NF-κB蛋白(p65)和IκBα磷酸化水平来发挥抗炎活性。


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