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毒死蜱降解菌株Sphingopyxis terrae R17的分离鉴定及其luxAB基因标记研究

李瑞雪  
【摘要】: 1.采用摇瓶富集法和土壤富集法,对农药厂排污沟污泥和土壤进行驯化培养,从中分离得到24株菌,其中有6株菌对毒死蜱的降解效果较好,命名为E30、R17、P5、B1、Z5、T15,在48h对10 mg-L~(-1)毒死蜱的降解效率分别达55.47%、32.27%、58.15%。34.76%、27.10%、42.01%。 2.采用三亲本结合法将发光酶基因luxAB成功导入R17菌株得到标记菌株LuxR17,在暗室里可以观察到明显的荧光现象,连续转代20次均无质粒丢失现象。 3.对R17菌株进行生理生化和16S rDNA序列同源性分析,发现该菌株能以毒死蜱为唯一碳源进行生长,鉴定为Sphingopyxis terrae。 4. R17、LuxR17菌株的最适生长温度为35℃、最适pH为7~8。在此条件下R17培养28h后到达稳定期,菌落浓度达9.18×10~8 cfu-mL~(-1)。LuxR17菌株培养32h达稳定期,菌落浓度达1.04×10~9 cfu-mL~(-1)。 5. R17、LuxR17菌株在不同时间对10 mg-L~(-1)毒死蜱的降解特性研究结果表明,在1d、2d、3d和4d内,当R17菌株的接种量为9.18×10~7 cfu-mL~(-1)时,毒死蜱降解率分别达到18.59%、31.23%、36.55%和47.69%;LuxR17菌株的接种量为1.04×10~8 cfu-mL~(-1)时,毒死蜱的降解效率分别为17.72%、24.14%、35.06%和48.48%。 6. R17、LuxR17菌株对不同浓度毒死蜱的降解特性研究结果表明,对1 mg-L~(-1)、5 mg-L~(-1)和10 mg-L~(-1)的毒死蜱降解2d,R17对毒死蜱的降解率分别达到50.21%、43.46%和31.23%;LuxR17菌株对毒死蜱的降解效率分别为41.64%、35.20%和24.14%。 7. LuxR17菌株在自然土壤中和灭菌土壤中的存活状况研究结果表明,LuxR17菌株在土壤中的变化总的来说呈下降趋势,但在不同处理土壤中其下降的速度有所不同;在灭菌土壤中LuxR17的活菌数要比自然土壤中的多,在加有毒死蜱的土壤中LuxR17的活菌数要高于未加毒死蜱的土壤。 8.毒死蜱在不同处理土壤中的降解动态研究结果表明,自然土壤中毒死蜱的降解速率较灭菌土壤中的快,在加LuxR17菌液的土壤中毒死蜱的降解速率要显著高于未加LuxR17菌液的土壤。将LuxR17加入含20 mg-L~(-1)毒死蜱的灭菌土壤和自然土壤中降解3、6、9、12d后,灭菌土壤中毒死蜱的降解率分别达到42.37%、70.92%、80.04%和94.70%,自然土壤中毒死蜱的降解率分别达到55.92%、72.27%、89.13%和98.31%。


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