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茶树β-1,3-葡聚糖酶基因cDNA片段的克隆与序列分析

王朝霞  
【摘要】: 茶树是我国重要的经济作物之一。真菌病害是茶树最主要的病 害,一直影响着茶树的产量与品质。因此,有必要利用基因工程技 术控制真菌病害,培育茶树抗病品种。本论文首次从茶树中克隆出 β-1,3-葡聚糖酶基因cDNA1369bp连续序列,结果如下: 根据茶树叶片生化特点,对克氏—步法分离总RNA的方法做了 部分修改,从茶树鲜叶中分离、提取总RNA。根据已发表的其他植 物中β-1,3-葡聚糖酶基因的保守序列,设计一对简并引物,采用 RT-PCR技术,从茶树中扩增出366bp的cDNA片段(RTPCR.1)。 将该片段克隆到PGEM-T Easy Vector上进行序列测定和分析,结果 表明,此片段核苷酸序列和推导的氨基酸序列与已报道的其他植物 β-1,3-葡聚糖酶基因的cDNA相应序列有很高的一致性,认为该PCR 特异产物为茶树β-1,3-葡聚糖酶基因的cDNA片段。 根据此片段序列设计特异引物,利用3’RACE获得β-1,3-葡聚 糖酶cDNA 3’端1252bp的cDNA片段(3RACE.1),序列分析表 明:RTPCR.1 3’端249bp与3RACE.1 5’端为重复序列,3RACE.1 的核苷酸序列及其推测的氨基酸序列与拟南芥的β-1,3-葡聚糖酶基 因家族的cDNA相应序列同源性为50%-90%,因而本研究从茶树中 共克隆出含3’端β-1,3-葡聚糖酶基因的cDNA1369bp的连续序列。


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