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嗜温气单胞菌外膜蛋白型及其免疫保护性的研究

倪凌  
【摘要】: 应用动物实验、SDS-PAGE电泳和免疫印迹等方法对8株嗜温气单胞菌(BA1、BA3、BA10、BA11、BA15、BA16、XA23和BA6)的致病性、外膜蛋白型及其免疫保护性进行研究。 首先,将这8株细菌人工感染健康小鼠、鲫鱼和鳖。结果表明嗜水气单胞菌BA6株为非致病株,其余7株嗜温气单胞菌为致病株,但细菌的毒力大小在不同表型种间和不同菌株间都存在差异。 分别用超声波法、超声波加EP(EDTA和PMSF)法、研磨法和研磨加EP法四种不同方法提取了嗜水气单胞菌BA3株的外膜蛋白。SDS-PAGE电泳结果表明,超声波加EP法提取的外膜蛋白浓度最大,蛋白条带最清晰。进一步采用超声波加EP法提取了9株嗜温气单胞菌BA1、BA3、BA10、BA11、BA15、BA16、XA23、BA6(非致病株)和J-1(标准株)的外膜蛋白,并对其SDS-PAGE电泳图谱进行了分析,结果显示5株温和气单胞菌(BA10、BA11、BA15、BA16和XA23)的OMP型相似,4株嗜水气单胞菌(J-1、BA1、BA3和BA6)的OMP型相似。这些表明了不同表型种嗜温气单胞菌的OMP型存在一定的差异,而同一表型种的不同菌株间的OMP型尽管相似,但蛋白带的迁移率及颜色深浅却仍有差异。 采用免疫印迹技术对具有代表性的四株嗜温气单胞菌的外膜蛋白的抗原性进行了分析,结果表明相对分子量为40000的外膜蛋白是这四株细菌共同的抗原,而分子量为43000、50000、38000和50000的蛋白分子分别为嗜温气单胞菌J-1、BA3、BA15和XA23四株菌所特有的外膜蛋白抗原。 用标准株J-1的外膜蛋白免疫小鼠(50μg/只),二免10天后分别用J-1,BA3,BA15和XA23四株细菌攻毒。结果表明嗜温气单胞菌的外膜蛋白具有免疫保护性,能使小鼠抵御同种和不同表型种嗜温气单胞菌的攻击。这为研制气单胞菌外膜蛋白亚单位疫苗提供了理论依据。


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