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新城疫病毒(DNV)HN基因真核表达重组质粒的构建

仲大莲  
【摘要】: 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得两株新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因cDNA,然后定向插入真核表达质粒pcDNA3中,构建了含HN基因的重组质粒。 首先,将NDV Lasota株和F48E9株分别接种于9日龄SPF鸡胚,于37℃孵化36h,置4℃12h后收获鸡胚尿囊液。根据GenBank登录的这两株病毒的HN基因序列和pcDNA3的多克隆酶切位点,分别设计两对引物P1:5'-CCCAAGCTTATGGACCGCGCCGTTAGCCAAG-3',P2:5'-GCTCTAGACTAGCCAGACCTGGCTTCTC-3'和P3:5'-CGGGATCCATGGACCGTGTAGTTAGCC-3',P4:5'-CCGCTCGAGTTAAATCCCATCATCCTTGAG-3'。通过RT-PCR从接种病毒的鸡胚尿囊液中分别获得含两株NDVHN基因cDNA。琼脂糖电泳结果显示,其大小均约为1700bp,与GenBank登录的大小一致。 其次,将HN基因cDNA定向插入pcDNA3中。经双酶切鉴定,获得5个含HN基因cDNA的重组质粒,其中Lasota株的4个(pcDNA3-LHN1、peDNA3-LHN2、pcDNA3-LHN3和pcDNA3-LHN4),F48E9株的1个(pcDNA3-FHN)。进一步测定重组质粒pcDNA3-LHN1和pcDNA3-FHN中HN基因片段的核苷酸序列,表明与GenBank登录的相应的HN基因序列一致。 综上所述,本研究成功地构建了含Lasota株和F48E9株的HN基因cDNA的真核表达重组质粒,为新城疫新型核酸疫苗的实际应用奠定了基础。


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