小尾寒羊高繁殖力候选基因PTGS2和PRL的研究

【摘要】：摘 要 本研究建立了PCR-SSCP和PCR-RFLP两种方法。以PTGS2基因和PRL基因的多态性为研究内容，旨在探索此两个候选基因与小尾寒羊高繁殖力之间的关系，为我国开展小尾寒羊高繁殖力的遗传学基础研究提供科学依据。 应用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术对两组样本进行PTGS2基因和PRL基因多态性分析。一组为有产羔记录的小尾寒羊血样；另一组为四个无产羔记录的绵羊品种血样（湖羊，特克塞尔羊、萨福克羊、多赛特羊）。得到如下结果：PTGS2基因两对引物扩增片段研究发现：引物1扩增片段即启动区经SSCP分析不存在多态性。引物2扩增片段即外显子3到外显子5区域经RFLP分析存在酶切位点的突变，其中936位为多态切点，当该位点发生变异而导致该酶切位点出现时，产生420bp和516bp的两个片段。具有两种基因型（AA、AB），两个等位基因（A、B）。A基因频率明显高于B基因频率，遗传特性（杂合度、多态信息含量（PIC）和有效等位基因数）在五个绵羊品种差异不明显，特克塞尔羊的有效等位基因数、杂合度和PIC最小，分别为1.0951、0.0869、0.0831；萨福克羊的有效等位基因数、杂合度和PIC最大，分别为1.4204、0.2960、0.2522。对于多态信息含量而言，除萨福克羊达到中度多态外，其余四个绵羊品种均属于低度多态。经X2适合性检验，五个绵羊品种此扩增片段均处于Hardy-Weinberg平衡状态。 在有产羔记录的小尾寒羊中，引物2扩增片段与繁殖性状的最小二乘分析结果表明，对于小尾寒羊第一胎和第二胎产羔数，不同基因型对应的最小二乘平均值关系都是ABAA，但影响均未达到显著水平。 PRL基因两对引物扩增片段研究发现：引物2扩增片段即外显子5经SSCP分析不存在多态性。引物1扩增片段即5＇端调控区经SSCP分析存在位点突变。在有产羔记录的小尾寒羊中，出现两种基因型（AA、AB），两个等位基因（A、B），且A基因频率明显高于B基因频率，有效等位基因数、杂合度和PIC分别为1.0960、0.0878、0.0839，为低度多态。其余四个无产羔记录的绵羊品种均只发现了一个等位基因，达到了纯合。经X2适合性检验，五个绵羊品种此扩增片段均处于Hardy-Weinberg平衡状态。引物1扩增片段的突变序列进行克隆和测序分析，结果表明在5＇端调控区发生了一处碱基突变，即第63个碱基由G突变成T。此位点突变可能对PRL基因的转录调控有一定的影响，但尚需进一步确证。 在有产羔记录的小尾寒羊中，引物1扩增片段与繁殖性状的最小二乘分析结果表明，对于第一胎产羔数，AB型小尾寒羊产羔数比AA型平均多0.50只，影响达到0.05 WP=8 显著水平（P0.05）。对于第二胎产羔数，AB型小尾寒羊产羔数比AA型平均多0.57只，影响达到0.05显著水平（P0.05）。 本研究中发现的PTGS2基因引物2扩增片段多态性和PRL基因引物1扩增片段多态性可能与繁殖性状有关，但还需进一步研究。