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野生黑木耳多糖的提取及性质研究

张钟  
【摘要】: 本学位论文在对野生黑木耳与栽培黑木耳的蛋白质、脂肪、总糖等营养成分及多糖含量进行了分析比较的基础上,对野生黑木耳多糖的提取、纯化、理化性质、单糖组分等进行了研究,并就野生黑木耳多糖对实验性高脂血症小鼠的降脂作用进行了实验观察。主要试验结果如下: 1、野生黑木耳的蛋白质、脂肪、总糖、多糖含量分别比栽培黑木耳高0.70%、0.06%、1.40%、2.69%;野生黑木耳的水分、灰分和粗纤维含量分别比栽培黑木耳低0.26%、0.85%和1.19%。经SAS分析,蛋白质、脂肪、总糖和多糖含量差异不显著,水分含量差异显著,灰分含量和粗纤维含量都达到极显著差异。野生黑木耳的维生素C、维生素B_1和维生素B_2含量分别比栽培黑木耳高6.8mg.(100g)~(-1)、0.17mg.(100g)~(-1)和0.052mg.(100g)~(-1)。但野生黑木耳铁、硒、钙、锌的含量分别比栽培黑木耳低0.13mg.g~(-1)、0.005 ug.g~(-1)、118.59 mg.kg~(-1)、2.58mg.kg~(-1),经SAS分析,除铁的含量差异不显著外,其余都达到显著差异。 2、采用热水浸提、醇沉法提取野生黑木耳多糖,对野生黑木耳多糖提取工艺和一般理化性质进行了研究。选择浸提固液比、温度、时间和浸提次数作为单因素进行梯度实验,确定其条件范围,再通过正交实验L_9(3~4)进一步确定野生黑木耳水溶性多糖最佳提取工艺条件。结果表明最佳提取工艺为:固液比1∶40、浸提温度85℃、浸提时间2h、反复浸提2次。理化性质结果表明:提取的野生黑木耳多糖中含有多肽和AA,为蛋白质复合多糖。 3、采用微波法辅助提取野生黑木耳多糖,改进了传统的浸提工艺,通过单因素和正交实验确定微波辅助提取的最佳工艺条件。结果表明:采用水作为提取剂、微波功率为560W、提取时间为35s、料液比为1∶40、萃取时间为3h浸提效果最佳,多糖提取率达98.55%。与传统的浸提法相比,时间由24h缩短为30s+3h,多糖产率为7.12%,微波辅助提取多糖具有时间短、耗能低、提取率高等优点。 4、用两种方法(氯仿-正丁醇法和三氯乙酸-正丁醇法)脱除野生黑木耳粗多糖中的蛋白质,以脱蛋白率为指标,通过正交实验L_9(3~4)确定最佳脱蛋白分离工艺,对比两种方法中最佳组合粗多糖得率的差异。结果表明:三氯乙酸-正丁醇法比氯仿-正丁醇法的脱蛋白效果好,最佳水平脱蛋白率为70.69%,但样品中多糖损失较前者严重,多糖得率仅为67.87%;氯仿-正丁醇法最佳水平脱蛋白率为51.39%,多糖得率为80.31%。活性炭脱色正交试验结果:活性炭添加量6%,脱色温度为40℃,脱色时间为20min。双氧水脱色试验结果:双氧水浓度选用20%为好。两种方法处理对脱色效果差异不显著,对多糖得率有极显著的差异。因此,选用双氧水脱色效果较好。脱色脱蛋白后的多糖,经透析法除去小分子杂质,经醇沉淀、离心、冷冻干燥得纯多糖。纯多糖经酸水解后制成多糖水解液,用纸色谱法进行单糖组分分析。结果表明:野生黑木耳多糖由半乳糖和木糖两种单糖组成,Rf值分别是:0.36和0.44。 5、探讨野生黑木耳多糖(WAAU)对小鼠诱导型高脂血症降脂作用的影响。选用雄性昆明小鼠70只,经高脂饲料诱导成高脂血症模型,按体重和血清总胆固醇水平均衡分为7组,其中6个实验组分别经胃灌注一定量的WAAU多糖,每天一次,连续30天,对照组用等剂量的蒸馏水代替,观察WAAU多糖对小鼠体重,食量的影响及每周测定血浆脂质变化。结果表明:注射量在5%以上时小鼠的血清总胆固醇(TC)、血清甘油三脂(TG)显著降低(p<0.05)和血清高密度胆固醇(HDL-c)30后有显著升高(p<0.05)。当多糖注射量为5%以上时,具有明显的降脂效果。


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