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SARS病毒N蛋白与hUbc9蛋白的相互作用

卓越  
【摘要】: 严重急性呼吸道综合症(severe acute respiratory syndrome ,SARS)是一种新发现的急性呼吸道传染病,由SARS病毒引起以呼吸道肺上皮细胞损害为主的全身性疾病。此病毒是一种单链、正义的RNA病毒,同已知的冠状病毒家族均不十分接近,同源性只有40-60%。对SARS冠状病毒基因组的全面了解和重要蛋白的功能研究将有利于揭示该病毒的致病机理,为寻找有效的治疗药物,彻底战胜这场疾病奠定基础。 已知的许多RNA病毒的N蛋白是一个多功能的蛋白质,在病毒的生活周期中具有重要的作用。SARS病毒的核衣壳蛋白(N)是一种具有重要功能的结构蛋白,等电点为10.11,碱性,理论分子量为46 kDa,存在多个可能的磷酸化位点,与冠状病毒家族中其他的核衣壳蛋白有20~30%的同源性。在C末端结构域有一段富含赖氨酸的序列,属于典型的细胞核定位信号。在中间结构域,有一段SR富集区,推测可能与RNA的结合有关。SARS病毒核衣壳蛋白基因的复制、转录及蛋白组装,可能对SARS病毒致病有重要作用。 为了确定细胞内哪些蛋白与核衣壳蛋白相互作用,我们利用酵母双杂交鉴定法,在人肾cDNA文库中筛选到hUbc9,它是泛素介导的蛋白质降解系统和SUMO-1途径中最重要的酶之一。通过GST-pull down,酵母双杂交分析检测等方法确定hUbc9与SARS病毒核衣壳蛋白特异相互作用。同时,我们还对核衣壳蛋白氨基酸序列进行分析,初步认为170-220氨基酸残基是核衣壳蛋白与hUbc9发生结合的作用位点,这段序列包含富SR模体。这些研究结果表明,SARS病毒核衣壳蛋白与hUbc9的相互作用,可能与SARS病毒在细胞内的复制相关,甚至参与到SARS病毒的致病机理。这也是第一次报道了hUbc9与一种正链RNA病毒的结构蛋白相互作用,可能对抗SARS病毒的药物研究提供一个新的方向。


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