大豆异黄酮的提取分离技术研究

【摘要】： 大豆异黄酮是从大豆中提取出来的一类微量活性物质,具有多种重要的生理功能。本文以脱脂大豆粉为材料,研究了大豆异黄酮的提取分离和纯化工艺。 以染料木黄酮(Genistein)为标准样品,分别在259nm和250nm处测定染料木黄酮(Genistein)和大豆苷元(Daidzein)混合标准溶液的吸光值,对A(A259/A250)与C测定值/C实际值关系进行回归分析,建立了大豆异黄酮的双波长紫外检测法。 采用单因素实验和正交实验对大豆异黄酮的提取工艺进行了优化,研究结果表明,常规浸提的最佳条件:80%乙醇、20:1的液固比、60℃下提取3h,提取次数为1次,大豆异黄酮得率为2.60%。微波辅助提取的最佳工艺:微波功率240W、乙醇浓度60%、提取时间90s、液固比10:1,提取次数为1次,大豆异黄酮的得率为2.74%。试验结果还表明,两种方法提取的有效成分没有明显区别。由此可见,微波辅助比常规浸提的效率高。 研究了大豆异黄酮的三种纯化方法。结果显示,分别经等体积的乙酸乙酯和正丁醇萃取可使大豆异黄酮含量由5.72%分别提高到11.4%、12.8%;采用DM201型大孔吸附树脂、以80%乙醇溶液洗脱、流速为1.0BV/h,可使大豆异黄酮含量由5.72%提高到37.6%。 比较了硅胶柱层析法、聚酰胺柱层析法和高速逆流色谱法对大豆异黄酮分离纯化效果的影响。结果显示,采用硅胶柱,以乙酸乙酯一石油醚(10:3 v/v)为洗脱体系,流速1.0BV/h的条件下,可把大豆异黄酮的主要成分大体分开;采用聚酰胺层析法,得到两个洗脱组分,其主要成分为大豆异黄酮糖苷;采用高速逆流色谱,以甲醇/水/乙酸乙酯/正己烷为溶剂系统,转速800rpm,流动相流速为1.5ml/min,固定相可得到有效保留,能有效地分离其中的大豆苷元和染料木黄酮。