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山核桃叶总黄酮的提取分离与抗氧化作用的研究

陈红红  
【摘要】: 山核桃可以提炼油脂,也可做成干果,营养价值高,但是在加工过程中皮渣以及叶子一般都被丢弃或用作饲料,极为浪费。本论文研究了山核桃叶总黄酮的提取和精制工艺,同时探讨了山核桃叶总黄酮的抗氧化作用。研究试验得到的结果如下: 1.山核桃叶的提取液与盐酸-镁的定性试验,测定反应溶液显紫红色;此液与金属盐类试剂的络合反应,均有明显的橙黄色沉淀。用薄层层析(TLC)对山核桃叶提取物进行定性鉴别,发现提取物在硅胶G板上与芦丁标准品相同R_f值处出现了与其相同的鲜黄色斑点,Rf值为0.35。表明,山核桃叶的提取物中含有黄酮类物质。 2.本研究采用乙醇提取山核桃叶总黄酮,其总黄酮的纯度随提取温度、提取时间、乙醇浓度、料液比的增加而提高,通过正交试验提取山核桃叶总黄酮,结果表明,最高得率组为A_2B_3C_1D_2,达18.9568%,最低得率组是A_1B_1C_1D_1,仅8.1796%;同时,山核桃叶总黄酮纯度最高组是A_2B_1C_2D_3,其纯度为13.0533%,纯度最低是A_1B_1C_1D_1,仅8.8584%。从目的物纯度考察,4个因素的最佳水平组合为A_2B_1C_2D_3,即80%乙醇、液料比1:20、提取时间6h、提取温度90℃。 3.以总黄酮纯度为考察对象,通过几种分离纯化方法,即石灰乳-硫酸法、萃取法、硅藻土法、大孔树脂法,发现经大孔树脂分离的山核桃叶总黄酮的纯度含量最高,达59.63%,硅藻土法最低,黄酮含量仅25.37%;以总黄酮的得率为考察对象,得知萃取法分离的总黄酮得率最高,为1.113%,石灰乳-硫酸法分离得出的总黄酮的得率最低,仅0.638%。 4.试验结果表明山核桃叶总黄酮具有明显的抗氧化作用。 (1)对猪油抗氧化活性的测定。从检测结果可以看出,随着山核桃叶总黄酮添加到猪油中的量的增加,猪油的POV值和酸价上升的趋势逐渐减缓。从POV值看出,在第12天测量,0.2%山核桃叶总黄酮组POV值仅有4.03(med/kg),而空白组的POV值已经超过8.0(med/kg);从猪油的酸价的测定值可以看出,添加0.2%山核桃叶总黄酮组的猪油,在第12天添酸价仅有4.8(kgKOH/g),而空白组的酸价上升到8.2(kgKOH/g),表明山核桃叶总黄酮具有抗猪油酸败的作用,并且随着剂量的增加抗氧化活性增强。 (2)对衰老小鼠的抗衰老作用。灌胃42天后,可知,山核桃叶总黄酮能抑制并且减缓由D-半乳糖引起的机体衰老,能使衰老小鼠血清中的SOD活性增强,MDA含量降低,并且能抑制脑组织中MAO活性。各组SOD值中,高剂量组的SOD活力最高,达167.10(U/mL),衰老模型组最低,仅136.01(U/mL),表明山核桃叶总黄酮可以增强小鼠血清中SOD活性;通过对各组MDA含量的对比,可以看出,衰老模型组最高,达18.95(nmol/mL),山核桃叶总黄酮高剂量组最低,仅14.88(nmol/mL),说明山核桃叶总黄酮具有降低小鼠血清MDA含量的作用;通过检测得出,衰老模型组小鼠脑组织MAO量最高,达26.42(U/mg),山核桃叶总黄酮高剂量组最低,仅13.63(U/mg),表明山核桃叶总黄酮可以抑制小鼠脑组织中MAO活性。通过对小鼠血清SOD、MDA以及脑组织的MAO活性的检测,各组试验结果表明山核桃叶总黄酮具有增强小鼠体内抗氧化、延缓机体衰老的作用。 (3)对自由基的清除作用。山核桃叶总黄酮浓度为1.0mg/mL时,对羟自由基(·OH)的清除作用最大,清除率达63%,黄酮浓度为0.8mg/mL组的清除率次之,黄酮浓度0.2mg/mL组对羟自由基(·OH)的清除作用最小,清除率仅22%,说明山核桃叶总黄酮对羟自由基(·OH)具有清除作用,并且清除能力与添加山核桃叶浓度具呈明显的量效关系,即清除率随着山核桃叶总黄酮的浓度的增大而增大;山核桃叶总黄酮含量为1.0mg/mL时对超氧自由基(O_2~-)的抑制作用最强,达到58%,为0.2mg/mL时对O_2~-的抑制率最小,仅11%,表明山核桃叶总黄酮对邻苯三酚自氧化产生的O_2~-有抑制作用,并且抑制率随浓度的增大而增大,抑制能力与浓度呈明显的量效关系。


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