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鹅催乳素受体基因(PRLR)SNPs检测及其与产蛋量的关系

岳理  
【摘要】: 动物垂体前叶分泌的催乳素(Prolactin,PRL)具有广泛的生物学效应,在家畜中PRL主要涉及到其繁殖性能,在家禽中PRL主要影响就巢性,进而影响到产蛋性能等繁殖性状,这些作用均由催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)调节。大量研究表明:催乳素(PRL)的生理作用是通过位于靶细胞膜上的催乳素受体(PRLR)介导的。近年来PRLR在鸡、火鸡、鸽等动物中已被克隆。禽类抱性与催乳素受体密切相关。我国地方禽种强就巢性是其产蛋量低的主要因素之一。鉴此,本研究采用候选基因法,选择与就巢性状关系密切的PRLR基因,通过比较基因组学方法,应用Dnastar和PrimerPremier 5.0软件,共设计了10对引物对皖西白鹅PRLR基因的编码区和非翻译区序列进行克隆测序;运用PCR-SSCP技术对皖西白鹅PRLR基因外显子4、6和10,及5′UTR片段分别进行多态性分析并结合测序,检测其基因突变位点,并分析基因多态性及与皖西白鹅产蛋量间的相关性。同时,对莱茵鹅PRLR非编码区序列作了相应的测定以进行研究。 克隆了皖西白鹅和莱茵鹅PRLR基因非翻译区序列5′UTR(GenBank登录号:EU534407)。序列对比分析表明:皖西白鹅PRLR基因非编码区序列与家鸡和野鸭同源性分别为88%和94%。对皖西白鹅和莱茵鹅PRLR基因外显子第4、6 10和5UTR进行多态性检测,结果表明,外显子4,6扩增片段经SSCP检测均不存在多态性,外显子10比较长,全长1200多个bp,故设计了6对引物扩增片段,经SSCP检测发现皖西白鹅有2个SNP位点;克隆的5′UTR全长455bp,故设计了2对引物扩增片段,经SSCP检测其中莱茵鹅第5′UTR-1,发现有1个SNP位点。皖西白鹅PRLR基因外显子10-2的A181G突变导致编码的Ile64Val氨基酸变化,而外显子10-3的-/22A的缺失突变。5‘UTR-1引物扩增产生两种基因型片段的PCR产物,经纯化后进行克隆测序,结果发生一个-215/A的插入突变。 群体遗传分析表明,皖西白鹅PRLR10-2引物检测的两个等位基因,频率分别为0.7056和0.2944,PRLR10-3引物检测的两个等位基因频率分别为0.8389和0.1611;而莱茵鹅5'UTR-1引物检测的等位基因频率分别为0.8625、0.1375。在有产蛋记录的皖西白鹅群体中,外显子PRLR10-2检测的三种基因型频率分别为0.633、0.145和0.222,对应的产蛋量分别为21.46±6.20、22.21±5.95和28.97±5.74。最小二乘分析表明,基因型与皖西白鹅产蛋性能有显著的相关性(P<0.05)。皖西白鹅PRLR基因外显子PRLR10-3检测的多态位点是对产蛋性能影响不显著。


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