收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

抑制miRNA-21的表达对胆管癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及其靶基因的探讨

尤昊  
【摘要】:胆管癌是常见的胆道恶性肿瘤之一,其恶性程度高,且发病隐匿,早期诊断困难,手术切除率低。近年研究发现多种MicroRNA(miRNA)的表达异常与肿瘤的发生发展密切相关。其中,miRNA-21在胆管癌组织中呈高表达并起着癌基因的作用。本研究通过抑制人胆管癌细胞RBE中miRNA-21的表达,观察RBE细胞增殖、凋亡及侵袭的变化,并进一步探讨miRNA-21在RBE细胞中的作用机制。 目的:通过转染miRNA-21抑制剂,抑制人胆管癌细胞株RBE细胞miRNA-21的表达,观察RBE细胞增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的变化,并探讨miRNA-21在胆管癌细胞中可能调控的靶基因及其作用机制。 方法:以人胆管癌细胞RBE细胞为研究对象,根据处理方法不同,细胞分为四组:正常细胞组(cell组)、脂质体组(仅予脂质体,lipo组))、阴性对照组(转染无关序列, miRNA-21-NC )、miRNA-21抑制组(转染miRNA-21抑制剂,miRNA-21-IN)。经荧光定量PCR证实转染成功后,应用MTT方法检测细胞增殖活性的变化,应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,通过Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力的改变,通过荧光定量PCR技术及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RBE细胞中RECK, maspin mRNA及蛋白表达的改变。 结果:miRNA-21在经转染miRNA-21抑制剂后在RBE细胞中的表达得到有效抑制,荧光定量PCR结果显示与正常细胞相比,其表达下降了0.0014倍。MTT结果显示RBE细胞在抑制miRNA-21表达后增殖活性明显受到抑制(P0.05),流式细胞仪结果显示各组细胞凋亡率分别为2.29%(cell), 2.43%(lipo), 2.89%(miRNA-21-NC), 19.35%(miRNA-21-IN), miRNA-21的表达降低后,RBE细胞的凋亡率明显增高(P0.05),各组细胞Transwell小室显微镜下细胞计数分别为:54.0±2.1(cell), 45.4±3.2(lipo), 40.8±2.4(miRNA-21-NC), 19.2±1.5(miRNA-21-IN),实验组RBE细胞相对于对照组其侵袭力明显下降(P0.05)并且荧光定量PCR及western blot结果显示在miRNA-21抑制后,RECK, maspin mRNA及其蛋白的表达明显上调(P0.05)。 结论:通过抑制miRNA-21的表达可抑制RBE细胞的增值,促进RBE细胞的凋亡,降低RBE细胞的侵袭力,RECK及maspin作为miRNA-21的靶基因参与调控过程。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 唐朝晖;钟德玝;李海燕;李毓琴;丁思娟;江拥军;卿伯华;;紫杉醇诱导胆管癌QBC939细胞凋亡的初步研究[J];现代肿瘤医学;2010年05期
2 赵苏瑛;李岷;;miRNA与乳腺癌的关系及其研究进展[J];检验医学与临床;2010年18期
3 王洁;陈忠平;;miRNA在胶质瘤化疗耐药中的研究进展[J];中国神经肿瘤杂志;2011年02期
4 张罕松;王曙光;聂洪峰;;胃泌素和胆囊收缩素对胆管癌细胞浸润和转移的影响[J];消化外科;2006年02期
5 郑秀海;王曙光;;胆管癌浸润转移途径及其机制[J];世界华人消化杂志;2007年03期
6 李大江;陈健;陈长宏;王曙光;;胆管癌组织中层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达及其临床意义[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2007年01期
7 郑梦薇;邵志坚;;青蒿素对人胆管癌细胞的体外抑制作用[J];中国药业;2008年11期
8 孔燕;梁志清;;miRNA与肿瘤及子宫颈癌的研究进展[J];重庆医学;2008年16期
9 张博;孙强;杨晓;尉承泽;;MicroRNAs与乳腺癌研究[J];现代生物医学进展;2009年07期
10 易伟峰;;Micro RNA在胶质瘤组织表达差异谱的研究[J];中国现代医学杂志;2009年08期
11 曹锴;狄建彬;魏文祥;庞智;;miRNA在结肠癌早期诊断和筛选中的作用[J];世界华人消化杂志;2009年35期
12 云天洋;刘阳;;肿瘤相关microRNA及其表观遗传学调控机制[J];军医进修学院学报;2010年02期
13 顾劲扬;仇毓东;周建新;丁义涛;;胆管癌发病机制及治疗进展[J];肝胆外科杂志;2010年05期
14 宗飒;张绪超;吴一龙;;miRNAs及其基因启动子DNA甲基化在肿瘤研究中的进展[J];肿瘤防治研究;2010年12期
15 吴修胤;佟冬冬;张风河;;微小RNA与口腔鳞状细胞癌[J];生物医学工程研究;2011年01期
16 刘小方,邹声泉,裘法祖;丙肝病毒核心基因的克隆及其在胆管癌细胞中的表达[J];中华普通外科杂志;2002年09期
17 高家森,刘斌;三氧化二砷诱导人胆管癌细胞系HCCC-9810凋亡的初步研究[J];徐州医学院学报;2004年03期
18 郑玉姝;赵朴;赵宏坤;;microRNA及其在癌症和病毒感染治疗中的应用潜力[J];国外医学(药学分册);2006年06期
19 陈姬;曹仁贤;;miRNA与内分泌代谢病[J];国际病理科学与临床杂志;2007年05期
20 房宝英;何冬梅;张洹;;发现miRNA及其靶基因的研究方法[J];山东医药;2007年32期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈黎;李宁;;miRNA在猪卵母细胞成熟过程中作用[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年
2 王星果;郁建锋;龚道清;顾志良;;鸡脂肪组织和骨骼肌miRNA的筛选和表达研究[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
3 成海兰;姜孝成;;miRNA与水稻种子活力的相关性研究[A];第二届全国种子科学与技术学术研讨会论文摘要集[C];2011年
4 杨子学;陈宝安;;miRNA在淋巴造血和急性淋巴细胞白血病中的作用[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
5 付彦;吴徐行;杨德英;谢跃;古小彬;王淑贤;杨光友;;犬恶丝虫成虫miRNA的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
6 李霞;;MiRNA-miRNA Synergistic and Subpathway Network[A];第四届全国生物信息学与系统生物学学术大会论文集[C];2010年
7 何卓晶;洪艳;;病毒miRNA研究进展概述[A];2011年浙江省医学会医学病毒学分会、医学微生物与免疫学分会学术年会论文汇编[C];2011年
8 邹丰;刘丽江;;miRNA在肿瘤转移中的研究进展[A];第九届全国肿瘤转移学术大会暨2011年黑龙江省医学会肿瘤学年会摘要集[C];2011年
9 吴徐行;付彦;杨德英;谢跃;古小彬;王淑贤;杨光友;;多头带绦虫miRNA测序研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
10 刘奔;王涛;郑红;李海欣;张丽娜;陈可欣;杨达;张微;;利用miRNA芯片研究胃癌发病相关的miRNA及下游信号通路分析[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张忱;大鼠癫痫持续状态后海马miRNA表达谱的研究[D];中南大学;2010年
2 卢韶华;肺癌患者组织及血浆miRNA肿瘤标记物的发现及验证[D];复旦大学;2010年
3 何艳;肝细胞肝癌相关基因中miRNA结合靶点内多态的筛选及功能分析[D];苏州大学;2010年
4 李帅;miRNA-101和miRNA-122功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
5 夏伟;临床肿瘤标本中差异miRNA的检测及mir-200b功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
6 刘伟;SAMP8小鼠海马异常表达miRNA的鉴定和初步功能研究[D];中国协和医科大学;2009年
7 罗红春;胃癌miRNA表达谱及胃癌中显著下调的miR-9和miR-433的功能研究[D];重庆医科大学;2010年
8 茅凌翔;肠道病毒71型分子流行病学调查及miRNA抑制肠道病毒71型体外复制的研究[D];江苏大学;2011年
9 张文辉;胃远端腺癌miRNA表达谱及miR-204调控机制的初步研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
10 阴祖军;胁迫诱导棉花microRNA的差异表达分析[D];山东农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 尤昊;抑制miRNA-21的表达对胆管癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及其靶基因的探讨[D];安徽医科大学;2011年
2 赵百慧;油松胚珠游离核分裂期miRNA的克隆与初步鉴定[D];北京林业大学;2010年
3 张坤山;调控过氧化物酶体生物合成与增殖的miRNA分析与鉴定[D];南昌大学;2010年
4 黎媚媚;内含子27碱基miRNA对内皮一氧化氮合酶调控机制的研究[D];南华大学;2010年
5 杨文征;马铃薯保守性miRNAs的预测与验证[D];浙江理工大学;2010年
6 郑培明;白纹伊蚊miRNA的测序、鉴定及表达谱的初步分析[D];南方医科大学;2010年
7 黄宝春;内含子miRNA反馈调节其宿主基因表达和功能的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
8 罗荣;DmiR:小RNA转录组深度测序的miRNA预测[D];福建农林大学;2011年
9 薄维平;木薯耐寒相关microRNA的差异表达分析[D];海南大学;2010年
10 周鹏方;猪和甲型流感病毒microRNA预测软件系统[D];西北农林科技大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 张晔;细胞中“宅男宅女”是传递“信号”大使[N];科技日报;2010年
2 实习生 蒋洪涛 王昊魁;miRNA—21:让肿瘤对它“上瘾”[N];科技日报;2010年
3 记者 许琦敏;“全球特工”高效调控生命活动[N];文汇报;2010年
4 ;生物芯片 临床应用渐入佳境[N];健康报;2010年
5 蒋立明;建立研发基地 开发高新技术[N];绍兴日报;2009年
6 衣晓峰 陈英云;微小核苷酸:揭开心律失常和心源性猝死之谜[N];中国医药报;2010年
7 记者 常丽君;验血可比CT扫描提前28个月发现肺癌[N];科技日报;2011年
8 胡献国;中药可诱导肿瘤细胞凋亡[N];中国中医药报;2001年
9 杨堤林;中药可诱导肿瘤细胞凋亡[N];中国中医药报;2004年
10 杨堤林;哪些中药可诱导肿瘤细胞凋亡[N];大众卫生报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978