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甲状腺素对成年期甲状腺功能减退大鼠前额叶SNARE和syt-1表达的影响

杨会云  
【摘要】:目的 以成年雄性Sprague-Dawley大鼠腹腔注射丙基硫氧嘧啶(6-n-propyl-2-thiouracil, PTU)1 mg/100g?体重建立成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)动物模型,研究成年期甲减大鼠前额叶可溶性N‐乙基马来酰胺敏感因子附着蛋白受体(soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor,SNARE)和突触结合蛋白-1(synaptotagmin-1,syt-1)的表达情况及甲状腺素替代治疗后的恢复状况,探讨甲减脑损伤及恢复的分子机制。 方法健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠45只,体重250~300?g,适应性喂养1周后,将大鼠随机分为4组:(1)?甲减组大鼠每日腹腔注射PTU 1 mg/100g体重(BW)共六周(n = 12);(2)小剂量甲状腺激素替代治疗组(T4-5组, n = 11)。大鼠每日腹腔注射PTU 1 mg/100g BW,四周后每日给予左旋甲状腺素(Levothyroxine, L-T4)5μg/100g BW两周;(3)大剂量甲状腺激素替代治疗组(T4-20组, n = 11)。大鼠每日腹腔注射PTU 1 mg/100g BW,四周后每日给予L-T4 20μg/100g BW两周;(4)正常对照组大鼠每日腹腔注射同体积生理盐水六周(n = 11)。造模结束后,采血取脑,应用放射免疫法检测大鼠血清T3、T4水平,超敏S-P法行免疫组织化学检测,光学显微镜拍摄前额叶分子层(Ⅰ),外颗粒层(Ⅱ),外椎体层(Ⅲ),内颗粒层(Ⅳ)和内椎体层(Ⅴ)照片,应用生物图像分析系统对前额叶五层SNARE和syt-1免疫反应产物进行光密度值分析,以平均光密度(average optical density, AOD)值作为观察指标。所有数据以(x|ˉ)±s表示,运用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析(one way ANOVA),进一步Post hoc分析采用LSD法进行多重比较。Ps 0.05具有统计学意义。 结果 1.体重变化 造模前各组大鼠体重无统计学差异(F(3,42) = 0.21, P = 0.93)。造模结束后,正常对照组大鼠体重增加49.0%,而甲减组、T4-5组、T4-20组分别增加21.5%、32.5%和26.1%(与正常对照组比较,Ps 0.05)。 2.血清T3、T4水平 与正常对照组相比,甲减组大鼠血清T3、T4水平显著降低,分别为对照组的53.6%、77.5% (Ps 0.02);小剂量替代治疗组大鼠血清T3、T4恢复至正常对照组水平;大剂量替代治疗组大鼠血清T3、T4显著高于小剂量替代治疗组和正常对照组(Ps 0.001)。 3. SNAP-25、syntaxin-1、ⅤAMP-2、syt-1蛋白在各组大鼠前额叶各层内表达量的变化 免疫组化检测显示:SNAP-25、syntaxin-1、ⅤAMP-2、syt-1的免疫反应产物在四组大鼠前额叶Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ和Ⅴ层内的分布相似,阳性颗粒(棕黄色)在各区的每一层均有分布,但密度不同。量化分析结果显示:甲减组大鼠前额叶Ⅰ,Ⅱ,?Ⅲ,Ⅳ和Ⅴ层内SNAP-25蛋白表达水平较正常对照组显著增多(Ps 0.001);予大、小剂量甲状腺激素替代治疗后,SNAP-25的蛋白表达水平在前额叶五层内与正常对照组比较均无统计学差异,与甲减组比较,小剂量替代治疗组大鼠额叶五层无明显不同(Ps 0.05),大剂量替代治疗组大鼠前额叶各层内SNAP-25表达水平均显著降低(Ps 0.05)。甲减组syntaxin-1和syt-1蛋白表达水平较正常对照组显著减少(Ps 0.001);大、小剂量甲状腺激素替代治疗后,syntaxin-1和syt-1蛋白表达水平与正常对照组相比均无统计学差异,与甲减组比较,小剂量替代治疗组大鼠额叶Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ和Ⅴ四层的syntaxin-1蛋白表达显著增加,syt-1蛋白在小剂量替代治疗时前额叶Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ?及Ⅴ层表达增加明显(Ps 0.05),但大剂量替代治疗后两种蛋白在前额叶五层的表达均有统计学意义的增加(Ps 0.05)。ⅤAMP-2的蛋白表达水平在前额叶各组间没有统计学意义的差异。 结论 1.成年期甲减大鼠前额叶的SNAP-25蛋白表达增加,syntaxin-1和syt-1蛋白表达减少,ⅤAMP-2无统计学意义的变化。 2.甲状腺素替代治疗能使升高的SNAP-25蛋白和降低的syntaxin-1,syt-1蛋白水平恢复,且大剂量甲状腺激素恢复更接近于正常水平。


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