收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

细胞损伤早期线粒体裂解的时间曲线及环孢素A对线粒体膜稳定作用的初步探讨

郑科  
【摘要】:目的创伤导致机体出现全身炎症反应综合征,甚至发生多器官功能衰竭。全身炎症反应综合征的发病机制及防治至今仍未完全了解。现已有许多实验研究证实当机体损伤时,组织细胞破裂,线粒体释放入循环系统,待线粒体裂解后,大规模激发炎症反应,继而发生SIRS,甚至引发MODS。由于线粒体是一种稳定的膜细胞器,它在机体损伤后,多长时间会由细胞内释放出来,多长时间会裂解,现在还都不清楚。本实验将试图揭示细胞损伤早期线粒体释放入血后的裂解时间曲线,同时观察细胞膜保护药物环孢霉素A对线粒体膜稳定作用的效果。方法本研究在细胞水平、分子水平,探索线粒体膜结构的稳定性,以及抑制线粒体膜裂解的方法,作为一种源头性抑制损伤相关分子模式启动失控性SIRS的机制,从分子、细胞展开研究,阐明细胞损伤后线粒体释放入血,其膜破裂的时间变化曲线及其抑制因素。并将线粒体作为一种预警机制引入损伤控制外科学,探索机体严重创伤后SIRS防治新靶点。 第一部分:取6g新鲜大鼠肝脏组织,分别用蔗糖法和试剂盒法提取3g大鼠肝脏组织中的线粒体,从线粒体提取纯度来评价线粒体提取质量,探索适合于我们线粒体实验研究的大鼠肝脏细胞线粒体的提取方法,同时也为线粒体提取质量的评价提供实验依据。 第二部分:将新鲜大鼠线粒体从大鼠肝脏中提取出来,利用MAO的浓度表示线粒体的浓度,将MAO浓度为200U/ml的线粒体悬液5ml置于20ml大鼠血清中培养,12小时内在不同时间点(每半小时一次)测定培养基中MAO、COX及MDH的含量。观察线粒体膜和基质中各自特异性酶的含量时间变化曲线,分析线粒体膜裂解高峰出现的时间。 第三部分:再次从大鼠肝脏中将新鲜大鼠线粒体提取出来,将MAO浓度为200U/ml的线粒体悬液5ml置于20ml大鼠血清中培养,同时加用1ml100mg/ml的环孢霉素A药物对线粒体膜进行保护,仍在12小时内不同时间点(每半小时一次)测定培养基中线粒体内膜和基质中各自特异性酶COX及MDH的浓度。设置对照组,加入1ml生理盐水。同时测定两组的浓度时间变化曲线,统计学分析,观察该药物对线粒体膜破裂是否有明确抑制作用。 结果 1、试剂盒法和蔗糖法分别提取的线粒体琥珀酸脱氢酶和酸性磷酸酶的纯化倍数没有统计学差异(P0.05),但蔗糖法提取的线粒体碱性磷酸酶的纯化倍数大于试剂盒法,差异有统计学意义(P0.05)。即使用组织线粒体分离试剂盒提取的线粒体的细胞膜污染较使用蔗糖法提取的小,更适合用于今后实验所需要的提取线粒体步骤中。 2、线粒体离体培养时COX和MDH的浓度分别在3小时、3.5小时到达峰值。实验结果表明培养液中MAO的浓度随着时间的变化没有明显改变,但COX和MDH的含量会随着时间的延长逐渐增加,到达波峰,再平缓下降。由此可知完整线粒体由细胞中释放出来后大约3.5小时达到裂解的峰值。 3、对照组中COX、MDH峰值出现于3小时、3.5小时,峰值分别为1.384U/l,34.568U/l;实验组中COX、MDH峰值出现于6小时、6.5小时,峰值分别为1.376U/l,31.994U/l。2组数据各个时间点分别进行统计学分析,3小时时,对照组中COX浓度显著高于实验组(P0.05);3.5小时时,对照组中MDH浓度显著也显著高于实验组(P0.05)。由此可知,加入环孢霉素A药物作用线粒体后,线粒体膜裂解时间显著推迟,并且峰值数值均稍降低。 结论 机体损伤后细胞破裂,完整线粒体释放入血,经过3.5小时达到其裂解峰值,加用环孢霉素A药物可以显著延迟线粒体的裂解,并降低其峰值水平。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 吴东方;张蕾;刘环香;;辛伐他汀对大鼠骨骼肌线粒体膜流动性及ATP酶活性的影响[J];中国医院药学杂志;2007年05期
2 李晓东;陆松敏;史成和;徐华彪;刘建仓;龙在云;李萍;;Rg1对失血性休克大鼠肠上皮细胞保护作用的实验研究[J];创伤外科杂志;2006年02期
3 陈莲;高洪;赵汝;高利波;;喹乙醇对鸡生物膜磷脂酶A_2活性和膜磷脂代谢的影响[J];中国病理生理杂志;2007年08期
4 刘晓红;吕元红;;线粒体脂肪酸氧化缺陷与能量代谢研究[J];中国优生与遗传杂志;2006年08期
5 张宇雯;刘兴汉;;唯BH3域蛋白与细胞凋亡[J];医学分子生物学杂志;2007年02期
6 梁伟伦;黄慧玲;武俏丽;王辰;张文治;苏心;只达石;;α-生育酚对脑皮层神经元线粒体的保护作用[J];中国比较医学杂志;2007年10期
7 李捷萌;陈彦青;刘荣国;;线粒体凋亡途径与Bcl-2家族蛋白研究进展[J];医学综述;2008年04期
8 单长民,李娟;线粒体膜的酶蛋白质及其转运的分子遗传学研究[J];国外医学.遗传学分册;1996年05期
9 胡洁,蔡真;细胞器相关凋亡途径研究进展[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2005年02期
10 柴勇;刘丹如;;HIV vpr蛋白诱导细胞凋亡的线粒体途径研究进展[J];包头医学院学报;2006年04期
11 羊建;刘佳佳;薛晓婕;张姿;何浩;;ONO-AE-248诱导中性粒细胞非凋亡性程序化死亡线粒体形态结构的变化[J];中国免疫学杂志;2007年06期
12 邓巍;江端;王世红;黄星原;;不同剂量卡托普利对病毒性心肌炎小鼠心肌线粒体的保护效应[J];实用儿科临床杂志;2007年13期
13 马琪林;鲁丛霞;蔡琰;苏敏;林其谁;;金刚烷胺对帕金森病患者线粒体谷氨酸载体活性的影响[J];中华神经医学杂志;2007年04期
14 韩伟;朱长连;王小阳;;新生儿脑缺氧缺血后细胞凋亡的线粒体机制[J];医药论坛杂志;2010年12期
15 唐愿映;姬爱冬;邹缄;刘沸珍;;内膜复原汤对受损子宫内膜线粒体功能调控机制的临床研究[J];中国民族民间医药;2010年21期
16 徐灵均;张吉翔;;线粒体损伤相关分子模式与创伤性败血症[J];生命的化学;2011年03期
17 程刚;张宁;蔡卫华;;急性脊髓损伤后线粒体的功能变化[J];医学研究生学报;2011年08期
18 秦春明;侯华新;黎丹戎;梁燕;陈冬莲;;大黄素致鼻咽癌细胞CNE-1胀亡和线粒体膜通透性的研究[J];求医问药(下半月);2011年06期
19 陈春生,王均衡,刘秀萍,徐晓莹,马丽英,李晖;L_(7811)白血病细胞线粒体膜流动性的测定[J];哈尔滨医科大学学报;1991年01期
20 张兆辉;范湘鸿;余绍祖;李淡馨;;用荧光探剂DPH和ANS研究川芎嗪对缺血鼠脑线粒体膜流动性的影响[J];卒中与神经疾病;1996年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张琳;;线粒体膜间隙促凋亡因子与运动心肌细胞凋亡[A];2008年神经内分泌暨神经免疫内分泌学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年
2 文佳;葛素云;罗海玲;岳度兵;靳晓霞;许旭;闫乐艳;刘昆;袁飞;;日粮维生素E水平对羊肌纤维细胞膜和线粒体抗氧化性的影响[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2010年
3 刘扬;Hans NohI;;线粒体膜内阿霉素半醌生成机理的ESR探索[A];第十届全国波谱学学术会议论文摘要集[C];1998年
4 张陆勇;;喜马拉雅旱獭作为药物线粒体毒性评价替代模型的初步研究[A];提高药物研究质量 保证人类用药安全——全国药物临床前安全性评价(GLP)第三期高级培训班会议资料[C];2010年
5 殷玲豫;张凤竹;;肺细胞线粒体膜流动性的改变与线粒H-ATP体酶的关系[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
6 储著朗;王建;杨晓明;汪思应;;线粒体膜间隙内蛋白质间相互作用网络的初步研究[A];中国病理生理学会受体、肿瘤和免疫专业委员会联合学术会议论文汇编[C];2010年
7 刘小蓉;章悦;李冉;刘义;;荧光偏振法测定线粒体膜的流动性[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年
8 韩峰;陶蓉蓉;陈颖娴;张根生;刘璐璐;黄继云;;线粒体HtrA2-pea15稳态失衡介导血管内皮细胞损伤及药物调控[A];2010施慧达杯第十届全国青年药学工作者最新科研成果交流会论文集[C];2010年
9 王小洪;孟海伟;冯蕾;吴凤霞;何秀全;景爱红;张忠和;刘树伟;;EGB761对6-OHDA所致PC12细胞损伤的抑制作用研究[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
10 宋淑珍;房征宇;汪德清;田亚平;;葛根总黄酮对H_2O_2所致PC_(12)细胞损伤防护效能研究[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 冯卫红;新化合物FLZ-52A抗实验性帕金森氏病的药理学研究[D];中国协和医科大学;2000年
2 何燕;线粒体Cx43预防兔心肌缺血/再灌注损伤作用机制的研究[D];广西医科大学;2010年
3 覃保瑜;糖尿病肾病大鼠尿液和肾皮质线粒体蛋白质组学研究[D];广西医科大学;2011年
4 程月发;葛根素通过细胞凋亡途径干预帕金森病模型的研究[D];安徽医科大学;2009年
5 孔晓霞;Bcl-2在氧化应激诱导神经胶质瘤细胞自吞噬和凋亡中的作用机制[D];吉林大学;2009年
6 郭晓明;外源性磷酸肌酸对低氧大鼠心脏的保护作用[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年
7 石俊;模拟缺血再灌注诱导神经元凋亡与MT/NAC抗凋亡机理的研究[D];华中科技大学;2006年
8 李颖;骨质疏松症中骨骼肌线粒体的功能变化及机制研究[D];广州中医药大学;2009年
9 张毅;2-(α-羟基戊基)苯甲酸钾盐(dl-PHPB)对脑缺血的治疗作用及机制研究[D];中国协和医科大学;2005年
10 程宇星;大柴胡汤治疗急性胰腺炎对胰腺腺泡细胞线粒体蛋白质的影响[D];广州中医药大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郑科;细胞损伤早期线粒体裂解的时间曲线及环孢素A对线粒体膜稳定作用的初步探讨[D];安徽医科大学;2013年
2 李永辉;一氧化氮合酶抑制剂对局灶性脑缺血大鼠脑线粒体损伤的影响[D];河北医科大学;2005年
3 代斌;五倍子提取物的体外抗氧化作用研究[D];陕西师范大学;2009年
4 陈香郡;线粒体融合、分裂在锰诱导的PC12细胞损伤中的作用及其机制的初步研究[D];第四军医大学;2010年
5 田茜;人工老化对大豆种子线粒体结构功能和抗氧化系统的影响[D];中国农业科学院;2011年
6 孙丽娟;前脑特异性Presenilins双敲除小鼠模型中线粒体结构与功能的探讨[D];华东师范大学;2010年
7 杨志敏;线粒体膜通透性转换孔在大鼠非酒精性脂肪性肝病中的作用及其机制研究[D];泸州医学院;2010年
8 韩敬哲;雷帕霉素对SOD1转基因小鼠线粒体质量控制机制的影响[D];河北医科大学;2012年
9 金芬芬;镉对华溪蟹肝胰腺线粒体抗氧化系统及能量代谢的影响[D];山西大学;2011年
10 彭建涛;盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)中线粒体及细胞色素c在柄细胞凋亡中的作用的研究[D];华东师范大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 常丽君;一组线粒体蛋白能延长生物寿命[N];科技日报;2011年
2 张中桥;银杏叶提取物对细胞损伤有保护作用[N];中国医药报;2007年
3 中国农业大学食品与营养工程学院副教授 范志红;茄子 茄碱有利也有弊[N];健康报;2009年
4 吴一福;僵知饮对胰岛β细胞损伤有修复作用[N];中国医药报;2005年
5 蒋明;电磁辐射可致睾丸生殖细胞损伤[N];中国医药报;2005年
6 吴一福;中药抗辐射作用获证实[N];中国医药报;2006年
7 杨嘉珍欧阳作宪;葛根素对脑细胞损伤有保护作用[N];中国中医药报;2008年
8 记者白毅;ASICs是介导缺血性神经细胞损伤的重要分子[N];中国医药报;2005年
9 张中桥;银杏叶提取物能减少细胞凋亡[N];中国中医药报;2007年
10 本报记者 李禾;怎样饮食才能有效预防癌症?[N];科技日报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978