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Notch 1信号通路对人肝癌SMMC 7721细胞中高纯度CD133~+细胞增殖和凋亡的影响

吴乐乐  
【摘要】:目的研究人肝癌SMMC 7721细胞中CD 133+细胞的干细胞特性,初步探讨调控Notch 1信号通路对CD 133+细胞亚群增殖和凋亡的影响方法流式细胞术分选出肝癌SMMC 7721细胞中的CD133+细胞,并检测SMMC7721细胞中CD133+细胞进行流式分选前后所占比率,进行体内的裸鼠成瘤实验和体外的软琼脂集落实验验证CD133+细胞是具有研究价值的高致瘤性细胞亚群。RT-PCR检测高纯度CD133+细胞中Notch信号系统受体和配体的表达情况,进而对Notch 1信号系统进行调控分析,将高纯度CD133+细胞进行分组,分别为激活组(加入Notch 1信号通路激活剂Jagged 1蛋白)、抑制组(加入Notch 1信号通路抑制剂DAPT蛋白)、空白对照组(加入PBS缓冲液),检测分析调控后的3组CD133+细胞的Notch 1下游靶基因Hes-1的表达情况,MTT法检测分析3组细胞的增殖能力,流式细胞术检测分析3组细胞的凋亡能力。结果成功分选出CD 133+亚群细胞;软琼脂集落实验和裸鼠成瘤实验表明CD133+细胞较CD 133-细胞具有较强集落形成能力和体内成瘤能力。RT-PCR检测表明高纯度CD133+细胞亚群中存在Notch 1信号系统,且通过激活剂、抑制剂和PBS液作用CD133+细胞亚群后,激活组细胞中Notch 1信号通路下游靶基因Hes-1表达上调,反之,抑制组细胞中Notch 1信号通路下游靶基因Hes-1表达明显抑制(P0.05),表明对CD133+细胞Notch 1信号系统的调控成功,MTT法检测表明激活组的增殖能力明显减弱,反之,抑制组的增殖能力明显增强(P0.05),表示CD133+细胞的增殖能力的增强与激活的Notch 1信号系统有关,流式细胞术检测表明激活剂组细胞的凋亡能力明显增强,而抑制剂组细胞的凋亡能力明显减弱(P0.05),说明细胞凋亡能力的增强与Notch 1信号系统的激活有关。结论人肝癌SMMC 7721细胞中存在CD 133+细胞亚群,且CD133+细胞具有典型的干细胞特性。对高纯度CD133+细胞Notch 1信号系统激活和抑制的调控是可行的,且Notch 1信号系统对高纯度CD 133+细胞的增殖和凋亡发挥着重要作用,对此研究有利于掌握肿瘤的相关特性,进一步对其生物学特性和机制进行深入探索,为肝癌的治疗引出新的思路。


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