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乌药醇提物保护急性酒精性肝损伤的肠源性机制研究

谭明明  
【摘要】:背景:酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是严重危害人类健康的常见疾病之一,并呈逐年上升趋势,迄今为止治疗酒精性肝病尚无特效药物。因此研究治疗酒精性肝病的药物及其作用机制很有必要。目的:通过建立大鼠急性酒精性肝损伤模型,观察乌药醇提物对酒精性肝损伤的影响,进而探讨其针对酒精性肝损伤肠源性机制的保护作用。方法:将60只大鼠随机分为四组:正常对照组、模型对照组、阳性对照组(思密达0.6g/kg)以及乌药醇提物组;根据不同干预剂量又将乌药醇提物组分为乌药醇提物组3g/kg组、乌药醇提物2g/kg组和乌药醇提物1g/kg组。乌药醇提物的制备方法:取乌药适量,加入12BV75%乙醇提取1.5h,滤取药液,药渣继用10 BV乙醇提取1h,滤取药液,合并两次药液,减压回收乙醇并适当浓缩,即得乌药醇提物。临用前用适量纯化水稀释,使每1ml药液相当于0.5g生药。(1)于末次给药后将各组大鼠置代谢笼内,分别收集大鼠粪便(2颗每只),于-80℃中保存抽提肠道菌群总DNA,进行ERIC-PCR指纹图谱检测,对图谱作相似性聚类分析检测细菌种类;(2)将各组大鼠末次给药后禁食12h,分别于肝门静脉和腹主动脉取血,离心制备血清,测定血清ALT、AST、T.BIL、TNF-α、IL-6、IL-8、NF-κB、ET水平;(3)迅速处死大鼠并在冰台上摘取肝脏、胃、大肠及回盲部上方15cm处小肠,肝组织分别保存于液氮及福尔马林中备用,小肠保存于2.5%戊二醛及福尔马林中备用,胃及大肠保存于福尔马林中备用,采用HE染色法观察大鼠各脏器病理学改变,采用WB法测定肝组织中TLR4、CD68、CYP2E1的表达,采用电镜观察小肠粘膜微绒毛的变化。结果:对于急性酒精性肝损伤大鼠模型,乌药醇提物能:1.降低血清ALT、AST、TBIL含量;2.降低血清TNF-α、IL-6、IL-8、NF-κB、ET水平;3.下调大鼠肝组织TLR4、CD68、CYP2E1表达;4.减轻大鼠肝组织病理损伤;5、降低肠道粘膜的通透性;6.保护肠道的细菌微生态。结论:本研究提示乌药醇提物可能是通过调节肠道细菌微生态,保护肠道粘膜,恢复肠道运动功能,从而降低肠源性内毒素渗漏水平;减轻内毒素与库弗细胞表面受体结合,进一步减少NF-κB的激活,最终减轻炎症因子的释放而保护肝脏。


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