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脐血造血干/祖细胞体外扩增实验研究

刘会兰  
【摘要】:目的:探讨人脐血(Umbilical cord blood,UCB)造血干/祖细胞(Hematopoietic stem/progenitor cells,HSC/HPC)在适合临床移植条件下体外扩增以获得理想的造血干/祖细胞数量的最佳细胞因子组合及扩增时间,为UCB经体外扩增后成为高体重受者克服脐血移植(Umbilical cord blood transplantation,UCBT)细胞数量不足及缩短植入时间提供客观指标。方法:采集UCB10份,分离单个核细胞(mononuclear,MNC),免疫磁珠分选(MiniMACS)CD34~+细胞,4份UCB CD34~+细胞分别在在细胞因子组合为A:SCF+FL+TPO、B:SCF+FL+TPO+IL-3及C:SCF+FL+TPO+G-CSF支持的无血清、无基质的液体培养基中扩增培养14天,收集扩增前、扩增后7天及14天的细胞进行细胞表型分析、半固体集落培养及端粒酶活性分析。结果:在含细胞因子IL-3组扩增培养第7天及第14天,均获得了总有核细胞数(Total nucleated cells,TNC)及集落形成细胞(colony-forming cell,CFC)最大的扩增倍数。扩增第7天,IL-3组的CD34~+细胞扩增倍数为(10.11±7.21)倍,较其它两组稍低,但无统计学意义:三组CD_(33)~+细胞、CD_(41)~+细胞、CD_(71)~+细胞也得到了较大程度的扩增,IL-3组高于其它两组;三组扩增后的细胞端粒酶活性均上调,其OD值达最高,含IL-3组低于含G-CSF组(P=0.008)。随着扩增时间的延长,扩增后的细胞端粒酶活性均下降;CD34~+细胞占TNC的比例也明显下降,其它定向祖细胞的比例也出现先升高后下降的现象。结论:在SCF、FL、TPO及IL-3存在下,单份UCB的部分体外扩增7天内,可获得较大量的TNC及HPC,同时定向祖细胞的比例得以提高,与以配合支持长期植入的非扩增的UCB细胞共同组成移植物,从而加速移植早期的植入,又不影响长期植入的能力以满足成人移植的需要。扩增时间以7天内为宜。在SCF、FL、TPO存在下,IL-3的促分化能力大于G-CSF。


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