收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

FQ-RT-PCR检测外周血中hnRNP A2/B1定量方法的建立及hnRNP A2/B1表达水平与肺癌诊断意义的实验研究

常珍  
【摘要】:异质性胞核核糖核蛋白A2/B1(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)是一种癌生长蛋白,与肺癌的发生发展密切相关。研究表明,hnRNP A2/B1在所有正常细胞中存在低水平表达,在肺癌发生早期呈现hnRNP A2/B1表达异常,随着肿瘤的生长,hnRNP A2/B1的表达水平在达到高峰后有所下降,但仍维持一定水平的表达。目前多采用IHC(免疫组化)法和经典的RT-PCR法,分别从蛋白质水平和mRNA水平对hnRNP A2/B1进行定性或半定量检测。本研究采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法,就hnRNP A2/B1在肺癌患者与其他人群之间存在的hnRNP A2/B1表达水平差异进行定量研究,并探讨其在肺癌诊断中的应用价值。 一、FQ-RT-PCR检测hnRNP A2/B1外周血中定量方法的建立 近年来,有研究报道,在实体肿瘤患者的外周血中,除了可以检测到循环的肿瘤脱落细胞外,在血浆和血清中还可检测到自由循环的核酸。本课题尝试分离出肺癌患者外周血中肿瘤脱落细胞或完整细胞外肿瘤相关mRNA,并对其进行扩增研究,建立了基于RT-PCR的扩增系统。本研究采用基于ABI5700荧光定量PCR系统的TaqMan探针技术,对外周血中hnRNPA2/B1表达水平进行绝对定量。具体方法是采用浓度已知的DNA作为标准品建立标准曲线,与未知样本在同一反应板上同时定量,标准曲线为6个点。在建标准曲线同时,确定实时PCR的扩增效率;同时优化反应条件,使扩增效率尽量接近100%。以β-actin作为参比对照,即阳性平行对照(Parallel Positive Control, PPC)。目标基因和参比基因在平行反应管内同时进行定量测定。对定量结果进行标化的方法为:[DNA]样本/[DNA]PPC,或者DCt=Ct(样本)-Ct(PPC)。因为Ct值与起始DNA拷贝数的对数是反比关系,


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 彭建军,杨和平,熊玮,戴晓天;hnRNP A2/B1单克隆抗体对肺癌临床诊断价值的探讨[J];重庆医学;2004年11期
2 常珍,沈佐君,操乐杰;异质性胞核核糖核蛋白A2/B1与肺癌的早期诊断[J];临床检验杂志;2004年06期
3 吴驰,李为民,陈文彬,徐丹,魏大鹏,周清华;人肺癌细胞株中hnRNP A_2/B_1表达的研究[J];中国肺癌杂志;2004年02期
4 阮永华,金克炜;HnRNP A2/B1及FHIT与肺癌的早期诊断[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;2005年01期
5 杨玲,于孟学,林嘉友,高杨,尹宏恩;抗异质性胞核核糖核蛋白A2/RA33抗体酶联免疫吸附法的建立及临床应用[J];中华检验医学杂志;2003年07期
6 周美宏,张尚福,王艳萍,车国卫,陈小禾,朱文,周清华;核内不均一核糖核蛋白A_2/B_1在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义[J];中国肺癌杂志;2004年02期
7 卢兆桐,付强,耿明,丁吉元,寇仁业,邹志强;异质性细胞核核糖蛋白A2/B1在非小细胞肺癌的表达研究[J];实用医药杂志;2003年03期
8 卢兆桐,付强,耿明,尹格平,丁吉元,寇仁业,邹志强;非小细胞肺癌hnRNP A2/B1免疫组化及定量测定的临床意义[J];第二军医大学学报;2004年11期
9 刘丽诗,胡华成;不均一性核糖核蛋白A2/B1与肺癌的研究进展[J];国外医学.内科学分册;2005年03期
10 万敬员,张力,叶笃筠;选择性剪接调控机制的研究进展[J];医学分子生物学杂志;2003年06期
11 田德增,梁永杰;肺癌的早期诊断进展[J];同济大学学报(医学版);2004年03期
12 陈明勇,李为民,徐丹,魏大鹏,陈文彬;抗hnRNPB1单克隆抗体的制备与鉴定[J];四川大学学报(医学版);2005年03期
13 戚均超;孟曙芳;周海英;;血清和肺泡灌洗液中肿瘤标志物检测对肺癌的诊断价值分析[J];放射免疫学杂志;2009年03期
14 李龙芸;肺癌[J];癌症进展;2005年02期
15 朱文,周清华;肺癌筛查中的分子标志物[J];中国肺癌杂志;2004年06期
16 彭敏,李龙芸;肺癌的早期诊断[J];中华内科杂志;2003年12期
17 周欣,李龙云,郭子建;榄香烯乳对肺腺癌A549细胞hnRNPA2/B1的mRNA及蛋白表达的影响[J];临床肿瘤学杂志;2004年03期
18 闫成兰 ,李小峰 ,胡学芳;RA33/36抗原及抗RA33/36抗体的研究进展[J];中国药物与临床;2004年04期
19 杨玲,于孟学,林嘉友,高扬,陈杰;异质性胞核核糖核蛋白A2/B1 hnRNP A2/B1基因克隆及其在滑膜组织中的表达[J];中国医学科学院学报;2001年05期
20 杨玲,于孟学,杨川杰;抗异质性胞核核糖核蛋白(hnRNP)抗体与自身免疫病的关系[J];中国医学科学院学报;1999年04期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 罗正;李忠华;郑世军;;单核增生性李氏杆菌溶血素(LLO)与靶蛋白异质性核糖核蛋白M(hnRNP M)相互作用分子机理的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 ;Nuclear to cytoplasmic translocation of hnRNP U enhances TLR-induced proinflammatory cytokines production by stabilizing mRNAs in macrophages[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
3 张军;李娜;娄晓敏;汪浩;王敬强;徐宁志;刘斯奇;吕有勇;;HnRNP在多个肿瘤组织中的异常表达[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年
4 娄晓敏;肖汀;汪浩;郭素萍;赵康;程书钧;刘斯奇;高燕宁;徐宁志;;永生化的人支气管上皮细胞系M-BE的蛋白质组学分析[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年
5 谭小玲;许蜀闽;陈丽;高钰琪;;模拟8000m高原对小鼠肺组织中IPAS和Tra2β表达的影响[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
6 覃艳红;王宏伟;陈秀花;徐智芳;齐喜玲;徐菁;边思成;张琳琳;许艾宁;;L型PML-RARα融合基因不同异构体对维甲酸的敏感性及其机制探讨[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
7 贺福初;;Systematic -omics analysis of HBV-associated hepatocellular carcinoma[A];第四届全国生物信息学与系统生物学学术大会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 余沪荣;hnRNP K在爪蟾视神经再生中的作用及机制研究[D];复旦大学;2012年
2 肖锐;抑制SMN2外显子7剪接的调控蛋白的鉴定和作用机制研究[D];武汉大学;2012年
3 张文娟;可变剪切因子hnRNPL及组蛋白伴侣FACT复合物亚基SSRP1的结构生物学研究[D];中国科学技术大学;2013年
4 覃艳红;L型PML-RARα融合基因不同剪接异构体对维甲酸诱导分化的影响及与剪接因子hnRNPA1、ASF/SF2的相关性研究[D];山西医科大学;2011年
5 谈慧平;MicroRNA-277和反转录转座子gypsy促进脆性X前突变rCGG介导的神经退行性病变[D];华中科技大学;2011年
6 虞瑛姿;胞嘧啶脱氨酶APOBEC3DE和APOBEC3B对乙型肝炎病毒抑制研究[D];浙江大学;2011年
7 董重;丙戊酸对SH-SY5Y细胞作用的差异蛋白质组学研究[D];吉林大学;2011年
8 刘飞;食管癌差异表达蛋白的分离鉴定及功能研究[D];北京协和医学院;2011年
9 刘雪锋;非编码RNA gadd7对细胞周期和凋亡的作用及分子机制研究[D];北京协和医学院;2010年
10 高国振;宿主因子Cyclin T1和Sam68在Ⅰ型人免疫缺陷型病毒生活周期中的功能研究[D];武汉大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴艳;hnRNP A2/B1在脑缺血再灌注损伤中的表达研究[D];安徽医科大学;2011年
2 王志新;siRNA干扰hnRNP B1基因对A549细胞糖代谢及细胞增殖影响的研究[D];复旦大学;2011年
3 韩军;hnRNP A2/B1及p21~(WAF1)蛋白在非小细胞肺癌中表达及意义[D];安徽医科大学;2011年
4 王大巾;结合EGFR3’非翻译区的蛋白质复合物的分离与鉴定[D];浙江理工大学;2011年
5 李润生;Hn RNP A2/B1基因表达与hn RNP B1特异性抗体研究[D];安徽医科大学;2006年
6 毕海珊;H19通过干扰hnRNPU-actin复合物抑制RNA聚合酶介导的转录[D];第二军医大学;2013年
7 霍锦霞;家蚕squid基因的原核表达和定位分析[D];浙江理工大学;2010年
8 陈玲;Hnrnph1蛋白在小鼠精子发生中的功能研究[D];南京医科大学;2009年
9 石园;HnRNP A2/B1在NSCLC中的表达及其在NSCLC发病机制中的作用研究[D];复旦大学;2010年
10 刘文文;HL-60细胞裸鼠异种移植瘤差异蛋白质的研究[D];福建医科大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978