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烟曲霉菌与气道上皮细胞的相互作用

张志红  
【摘要】:背景 哮喘急性发作及死亡率表现出明显的季节性和昼夜节律性。烟曲霉菌孢子是空气中传播最广的霉菌之一,遍布室内外,其孢子直径在2-3μm,能被人吸入并且到达各级支气管和肺泡。孢子被吸入呼吸道后,可能会被清除,也可能会黏附到气道上皮细胞表面,接着芽生,而其芽生后的菌丝成为烟曲霉菌致病的主要形式。研究发现对烟曲霉菌过敏的人很多,表现出过敏性支气管肺曲霉菌病和哮喘样反应,甚至致死。气道上皮组织连接内外环境,除具备生理屏障作用外,在局部炎症反应中亦起重要作用,它可能通过其表面的Toll样受体识别微生物的某些成分从而参与机体先天免疫反应,Toll样受体则是连接先天免疫和获得性免疫反应的桥梁。此外,气道上皮还是炎症产物的重要来源,可以产生重要的炎症介质,如白细胞介素(Interleukin,IL)IL-6和IL-8。 目的 (1) 研究烟曲霉菌与呼吸道上皮细胞的相互作用及可能的ABPA和哮喘样反应的机制;(2) 研究呼吸道上皮细胞识别微生物的可能受体机制。 方法 (1) 将A549细胞和原代支气管上皮细胞分别与经不同方法处理的烟曲霉菌菌丝片段和孢子共培养,镜下观察上皮细胞形态学改变;菌丝以及孢子的黏附作用 (2) 同时收取培养悬浮液;(3) 制备cytospin,MGG染色观察气道上皮细胞系A549对于孢子的吞噬作用;(4) 免疫组化染色检测气道上皮细胞系A549上TLR2和TLR4的表达以及(5) 测定培养悬浮液内IL-6和IL-8水平。 结果 (1) A549以及支气管原代细胞形态学改变 在与酵母菌多聚糖、热灭活菌丝片段、射线灭活菌丝片段、灭活孢子、TNF-α共培养24小时后,A549细胞形态和支气管原代细胞形态未发生明


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