收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

SY1磷酸酶基因的原核表达及其单克隆抗体的初步制备

马广文  
【摘要】:目的:利用含有人的SY1的pBluescript R质粒,构建重组体,并用重组体转染原核细胞表达含SY1的融合蛋白,以此融合蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,为将来进一步研究该基因的功能打好基础。方法:用PCR扩增SY1的cds序列,限制性内切酶酶切,构建到pET28a(+)中,酶切、测序等鉴定后,重组体转化大肠杆菌,IPTG诱导重组蛋白表达,在变性条件下经Ni~(2+)-NTA凝胶亲和层析纯化目的蛋白。Western Blot方法检测重组蛋白的表达,用纯化的SY1蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞,采用常规杂交瘤技术方法制备杂交瘤细胞,克隆化筛选阳性细胞克隆,制备单克隆抗体。间接ELISA试验鉴定单克隆抗体并检测单克隆抗体的效价。结果:成功构建出pET28a(+)-SY1重组质粒,SDS-PAGE显示SY1融合蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在,Western Blot方法检测到融合蛋白的表达,发现有相对分子量为41KD的特异条带。以经过纯化的SY1蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠,通过ELISA方法鉴定单克隆抗体构建成功。结论:成功构建原核表达载体pET28a(+)-SY1,在原核细胞中表达成包涵体,这种包涵体可以作为抗原并成功制备出相应的单克隆抗体。该单克隆抗体的制备成功,为深入研究SY1的功能提供了有力工具。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 孙东波;冯力;刘杰;时洪艳;佟有恩;刘胜旺;童光志;;猪传染性胃肠炎病毒n基因的原核表达及重组蛋白的免疫活性分析[J];病毒学报;2006年02期
2 赵振国;江渝;彭家和;;人可溶性CD40L cDNA的克隆及表达[J];第四军医大学学报;2006年07期
3 徐凛峰;朱进;焦永军;张建平;;肝细胞癌患者组织中MAGE-1基因的原核表达及鉴定[J];南京医科大学学报(自然科学版);2006年07期
4 吴永革;尹艳春;孙天旭;于湘晖;姜春来;金英花;孔维;;阿尔采默病治疗性疫苗原核表达载体的构建[J];中国生物制品学杂志;2007年04期
5 何方平;王星;林仁勇;卢晓梅;冯晓辉;张亚楼;张跃新;何斌;温浩;;人类8型疱疹病毒K8.1基因原核表达重组质粒的构建[J];新疆医科大学学报;2007年02期
6 申静;罗学刚;周庆峰;叶亮;李松;奚涛;;人SMYD3基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达[J];药物生物技术;2007年04期
7 王鹏;王华茂;周敏;刘素霞;林志新;徐宇虹;李宗海;;腺病毒5型knob蛋白的原核表达、纯化及其单克隆抗体的制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年11期
8 徐波;郑永晨;费邵阳;高航;;大鼠血红素氧化酶1的基因克隆和原核表达[J];吉林大学学报(医学版);2007年06期
9 屈素洁;黄伟坚;冯建远;朱芸;陈琼;谢丽华;;猪圆环病毒2型ORF2基因及片段的原核表达[J];实验动物科学;2007年06期
10 冯智慧;焦淑贤;李长缨;胡彬;刘晓华;;人GST-PTEN融合蛋白的原核表达和纯化[J];医学分子生物学杂志;2008年04期
11 王健生;张明鑫;段小艺;王峥;周苏娜;张广健;王全颖;杨广笑;;Apoptin原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达[J];西安交通大学学报(医学版);2008年05期
12 李姣;郭建英;王爱萍;邓瑞广;张淑杰;游雷鸣;;一种猪-鼠B细胞杂交瘤的制备方法[J];第四军医大学学报;2009年03期
13 陈锐;刘友生;朱江;段光杰;易维京;胡川闽;;人源N-末端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)的原核表达及抗原性分析[J];免疫学杂志;2009年03期
14 欧阳萍;雷连成;吕爽;韩文瑜;赵瑞利;姜秋杰;;人溶菌酶基因的原核表达及其生物学活性[J];中国生物制品学杂志;2009年06期
15 石燕;戴晓丽;薛渊;何志强;周成林;王胜军;苏兆亮;陈建国;夏圣;邵启祥;黄新祥;许化溪;;小鼠高迁移率族蛋白1cDNA克隆、原核表达与鉴定[J];江苏大学学报(医学版);2009年03期
16 叶星明;姜昌丽;张英起;;重组人C22orf37融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定[J];第四军医大学学报;2009年12期
17 曹春雨;韩钰;任玉珊;王艳林;;人精胺氧化酶的原核表达及多克隆抗体制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年10期
18 吴玥;刘宝英;徐静;姜友昭;陈兵;;人锌转运体8强免疫原性片段的预测及原核表达鉴定[J];第三军医大学学报;2010年11期
19 刘迪;王桂军;赵圆圆;辛伟;魏建忠;李郁;孙裴;张训海;秦爱建;;J亚群鸡白血病病毒AH09/2株的gp85基因的克隆与原核表达[J];中国微生态学杂志;2010年08期
20 蒋朋飞;曹金锁;柳超;赵海平;张德礼;;猪新基因BCL-G_L的克隆与原核表达及其多克隆抗体的制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李慎涛;欧阳红生;张玉静;张锐;廖晓萍;孙博兴;张永亮;;猪肌生成抑制素基因原核表达载体的构建及其表达[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
2 袁菊;成军;洪源;陶明亮;李康;石磊;靳亚平;;HCV反式调节基因p7TP2原核表达载体的构建及融合蛋白表达[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
3 钟春燕;柳长柏;;pET15b-GFP-HCTP、pET15b-Apoptin-HCTP原核表达载体的构建、表达及其意义[A];第十届全国生化与分子药理学术会议论文摘要汇编[C];2007年
4 王晓娟;邬玉兰;刘志刚;;甜荞麦16KD过敏原基因的克隆及其原核表达载体的构建[A];中华医学会2009年全国变态反应学术会议论文汇编[C];2009年
5 王瑞晓;习欠云;束刚;高萍;王松波;王丽娜;江青艳;张永亮;;猪垂体SSTR2胞外区Ⅰ、Ⅱ肽片段融合蛋白原核表达载体的构建、表达及纯化[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
6 宁铂涛;汤永民;曹江;沈红强;钱柏芹;张海忠;张怡;郭莉;;抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单链抗体原核表达载体的构建表达及活性鉴定[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年
7 宁铂涛;汤永民;曹江;沈红强;钱柏芹;张海忠;张怡;郭莉;;抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单链抗体原核表达载体的构建表达及活性鉴定[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
8 王平;杨秀利;徐薇;储以微;熊思东;;新分子ITIP的原核表达、纯化及抗体制备[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
9 王秀敏;韩烈保;;豇豆蛋白酶抑制剂基因(CpTI)的克隆及其原核表达[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
10 杨宇;杨欣;孙欣;吴昊;吴江;;NT3—ABAD-DP—HA2-TAT融合基因原核表达载体的构建[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 程海鹏;人低分子量双特异性磷酸酶基因LMW-DSP2、LMW-DSP3的克隆与功能研究[D];复旦大学;2003年
2 危少华;人重组IL-24基因治疗乳腺癌的实验研究[D];苏州大学;2005年
3 郑璐;BC047440的原核表达、多克隆抗体制备及其在蛋白质水平表达的初步研究[D];第三军医大学;2008年
4 王(韦华);猪源乙型脑炎病毒SXBJ07株全长基因组克隆分析及ELISA检测方法的建立[D];西北农林科技大学;2009年
5 吴汉林;人NIT1基因cDNA的克隆、原核表达及抗体制备[D];四川大学;2005年
6 段冷昕;梅花鹿茸多肽的化学结构及其抗肝纤维化作用[D];吉林大学;2007年
7 姜海龙;狂犬病病毒糖/核融合基因DNA疫苗的研究[D];吉林农业大学;2006年
8 邓尚龙;石斑鱼抗菌肽Hepcidin基因的克隆、表达与抗菌活性研究[D];吉林农业大学;2008年
9 崔晓东;rBTI的内化及诱导Hep G2细胞自噬的研究[D];山西大学;2012年
10 徐冬梅;土壤酸性磷酸酶性质及汞、铜、锌对其影响的机理研究[D];浙江大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 马广文;SY1磷酸酶基因的原核表达及其单克隆抗体的初步制备[D];安徽医科大学;2006年
2 刘晓明;胸腺肽α1-干扰素α2b融合基因克隆表达及产物活性分析[D];吉林大学;2007年
3 孟文丽;江浙短尾蝮蛇纤溶酶原激活剂的原核表达、纯化及其鉴定[D];福建医科大学;2008年
4 樊可;重组人巨细胞病毒基因在大肠杆菌中的表达[D];大连理工大学;2011年
5 王莉;克隆与表达草鱼干扰素基因及其抗弹状病毒效果的研究[D];中国农业大学;2005年
6 王英南;人疱疹病毒7型被膜蛋白pp85的原核表达和应用[D];青岛大学;2005年
7 张苗;家蚕SCI-SB基因克隆及其原核表达的研究[D];浙江大学;2005年
8 周丹;猪细小病毒SC1株VP2基因表达载体的构建及其表达的研究[D];四川农业大学;2005年
9 郝炜;中国葡萄属野生种抗白粉病基因原核表达与抗体制备[D];西北农林科技大学;2005年
10 郭志刚;鸡白细胞介素2基因与鸡毒支原体H3株TM-1基因的串联及原核表达[D];内蒙古农业大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 叶菲;抗糖尿病药物的几个新靶点[N];健康报;2005年
2 记者 王艳红;酶可控制遗忘率[N];新华每日电讯;2002年
3 王正文;顽症肆虐几时休?[N];医药经济报;2001年
4 苏枫;点蚕成金 四川“女皇”破茧而出[N];经理日报;2003年
5 许文巧;绝经年龄为何有差异[N];中国医药报;2003年
6 ;植酸酶的作用机理[N];中国畜牧水产报;2000年
7 邹婕;小量激素增强糖尿病女性患者骨代谢[N];医药经济报;2002年
8 殷俊;南农大揭示两个水稻磷酸盐转运蛋白功能[N];江苏科技报;2009年
9 正军;抗体与初始C肽水平能预测糖尿病患者β细胞的功能[N];中国高新技术产业导报;2001年
10 刘军;钨酸盐可改善糖尿病医学模型的葡萄糖稳态[N];中国高新技术产业导报;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978