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维生素B_2光化学法灭活血浆中病原体的实验研究及其对血浆凝血因子活性影响的探讨

王志勇  
【摘要】:目的 (1)建立维生素B_2光化学法灭活病毒试验方法,探讨维生素B_2工作浓度与紫外线辐照时间对灭活效果的影响。(2)观察维生素B_2光化学法对血浆中病毒及细菌的灭活效果。(3)研究维生素B_2光化学法处理对血浆中凝血因子活性的影响。 方法:(1)以水泡性口腔炎病毒(Vesiculer Stomatitis Virus,VSV Indiana株)作为模型病毒,将滴度为7.25(1g,TCID_(50))的病毒悬液中分别加入终浓度为50,100,200及300μmol/L维生素B_2溶液,含不同浓度维生素B_2的病毒悬液分别以辐照剂量为0,600,1200,2400,3600及7200mJ/cm~2(0,5,10,20,30,60分钟)紫外光照射,观察维生素B_2浓度以及紫外线强度对灭活效果的影响。按终点稀释法,在Hep—2细胞长成单层的96孔细胞培养板上进行细胞对照、病毒对照、单纯维生素B_2对照、单纯紫外线对照及处理后样本病毒滴度的滴定。 (2)以水泡性口腔炎病毒作为模型病毒,以大肠埃希菌作为革兰氏阴性菌的模型菌,金黄色葡萄球菌作为革兰氏阳性菌的模型菌,将病毒浓度为6.251gPFU/ml的病毒悬液按1∶10比例加入血浆中、浓度为10~8/ml的大肠埃希菌及10~8/ml的金黄色葡萄球菌菌液按1∶100的比例分别加入血浆中,加入终浓度为50,100,200及300μmol/L维生素B_2溶液至各份血浆,含不同浓度维生素B_2的病毒悬液分别以强度为0,600,1200,2400,3600及7200mJ/cm~2紫外光照射(0-60分钟),以病毒蚀斑试验测定处理后及各对照病毒浓度,以细菌计数测定处理后含菌血浆及各对照细菌浓度。 (3)以正交试验原则选择最佳灭活条件,检测最佳灭活条件处理后的血浆及未处理对照、仅用维生素B2处理对照及紫外线照射处理对照血浆Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ因子活性,检测PT、APTT、TT时间,纤维蛋白原浓度及血浆PH值,观察处理前后及各处理因素对上述试验结果的影响。 结果:(1)工作浓度为300μmol/L的维生素B_2结合辐照剂量为1200mJ/cm~2紫外


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