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肾小球足细胞分子表达与氧化应激反应的关系

朱颖  
【摘要】: 目的 通过分析足细胞分子损伤与氧化应激反应的关系,初步探讨肾病状态下足细胞损伤的成因。 方法 (1)Wistar大鼠尾静脉单次注射阿霉素5mg/kg,建立大鼠阿霉素肾病模型,于不同时间点处死大鼠并留取尿液和肾组织标本,观察大鼠蛋白尿和肾组织中氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)活性变化及大鼠肾小球中nephrin蛋白分布及半定量变化;分析肾小球nephrin表达与氧化应激指标变化的关系。 (2)对阿霉素肾病大鼠进行维生素E及泼尼松干预,观察药物干预情况下肾病大鼠蛋白尿、氧化应激指标:MDA、SOD、T-AOC及足细胞nephrin、podocin、α-actinin-4表达变化。 (3)采集诊断明确的肾病综合征患儿清晨空腹外周血和晨尿,应用化学比色法检测患儿血中氧化应激指标:MDA、SOD、T-AOC,应用ELISA法检测患儿尿中足细胞标志蛋白Podocalyxin(PCX)。 结果 (1)自第7d起,肾病组大鼠肾皮质MDA含量较正常对照组明显升高,SOD和T-AOC活性较正常对照组明显降低,并持续至第28d(P<0.05);而24h尿蛋白排泄量自第14天起较正常对照组明显升高,并持续至第28d(P<0.01)。正常对照组大鼠nephrin蛋白沿肾小球基底膜呈深褐色、连续线性分布,肾病组随时间的延长nephrin蛋白染色向浅褐色、不连续、短线样模式转变;量化分析显示肾病组肾小球nephrin蛋白阳性表达量明显低于正常对照组(P<0.05)。相关分析显示肾小球nephrin蛋白阳性表达量与肾皮质MDA含量及24h尿蛋白排泄量呈负相关(r分别为-0.732和-0.894,P=0.000),与肾皮质SOD和T-AOC活性呈正相关(r分别为0.822和0.869,P=0.000)。 (2)阿霉素注射第28d时,维生素E干预组肾皮质MDA含量和24h尿蛋白排泄量明显低于肾病组,SOD、T-AOC活性明显高于肾病组(P<0.05)。维生素E和泼尼松干预组减轻了nephrin、podocin及α-actinin-4分子的异常改变;量化分析显示维生素E及泼尼松干预组肾小球nephrin、podocin阳性表达量较肾病组增加,α-actinin-4阳性表达量则较肾病组减少(P<0.05)。 (3)肾病综合征患儿疾病活动期血中MDA含量明显高于正常对照组,血中SOD、T-AOC活性明显低于正常对照组,差异具有显著性(P<0.05)。 (4)肾病综合征患儿疾病活动期与缓解期尿中足细胞标志蛋白PCX含量均明显高于正常对照组(P<0.05);其中活动期患儿尿PCX含量又明显高于缓解期患儿(P<0.05);且活动期患儿尿PCX含量与24h尿蛋白排泄量呈正相关(r=0.785,P=0.01)。 结论 (1)肾病状态下机体过氧化反应增强而抗氧化能力减弱; (2)肾病蛋白尿状态与足细胞损伤密切相关,阿霉素肾病大鼠裂隙膜分子nephrin表达减少或消失与以脂质过氧化为主的氧化应激反应密切相关; (3)抗氧化剂及糖皮质激素对足细胞分子nephrin、podocin、α-actinin-4损伤有保护作用。


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