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老鹰茶总黄酮的制备工艺及主要成分含量测定的研究

陆维丽  
【摘要】: 老鹰茶系樟科木姜子属毛豹皮樟(Litsea coreana Leve)的叶,又俗称“白茶”。前期药理学研究表明老鹰茶具有抗氧化、降糖、降脂、抗炎及免疫调节等功效,老鹰茶中含有黄酮、皂苷、有机酸、香豆素和鞣质等成分,其中黄酮类成分含量高,且是其活性主要成分。前期从该植物中分离得到了黄酮类化合物,经结构鉴定为儿茶素、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖和山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷,均有一定药理活性。随着对老鹰茶总黄酮(TFLC)的药理活性研究逐渐深入,对TFLC的制备和含量测定方法有待进一步探索和研究。本文对TFLC的制备工艺进行了研究;应用RP-HPLC法建立了测定老鹰茶中五种主要黄酮成分含量的方法,并比较了不同制备工艺产物的异同。 具体研究内容包括以下两个部分: 1.老鹰茶总黄酮制备工艺及主要成分的分离 以黄酮含量为评价指标,采用L9(33)正交试验对老鹰茶总黄酮水提取工艺进行优化,结果优化的生产工艺为用12倍量水提取3次,每次1小时。大孔吸附树脂是一类非离子型高分子聚合物,现已广泛地应用于中药有效成分尤其是黄酮类成分的纯化研究中。本文采用大孔吸附树脂纯化老鹰茶总黄酮,以吸附容量和解吸率为指标,筛选了四种吸附树脂,其中以非极性的D101型大孔吸附树脂最为适合于纯化老鹰茶总黄酮。并对D101纯化总黄酮的工艺参数进行考查,确定其工艺条件为原液上样浓度为1~1.5mg·ml-1,以1.5BV·h-1的吸附速率进行吸附,最大上样量以总黄酮计为7.14mg·g-1树脂。吸附后用3BV的70%乙醇以3 BV·h-1的速率进行洗脱。在此条件下进行吸附、洗脱,树脂可重复使用5次。采用该工艺纯化TFLC后,紫外分光光度法测定总黄酮回收率 90 %,平均纯度为48.59 %。本文采用正、反相硅胶色谱法反复对总黄酮进行分离,分别得四种黄酮类化合物,经与已知化合物比较,鉴定为:槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷和山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷。 2.老鹰茶总黄酮主要成分的含量测定 应用高效液相色谱法对TFLC中的儿茶素、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷的含量进行了测定。色谱条件为:Hypersil ODS色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm);流动相为乙腈:3 %醋酸溶液(18:82);流速为1.0 ml·min- 1;检测波长分别为280nm和355 nm。该法简便、准确、灵敏,对黄酮类化合物分离度良好,可用于TFLC的含量测定。在此基础上,应用HPLC法对比测定了不同制备工艺中老鹰茶黄酮类成分及含量的异同。结果发现,乙醇提取和水提取两种不同工艺产物中主要成分都是黄酮类化合物,含量较高的5种成分都为儿茶素、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖和山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷。其中儿茶素含量有较明显的差异,其它四种黄酮苷类化合物含量基本相同。


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