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新生大鼠缺氧缺血性脑病血清S100B蛋白表达变化的实验研究

冯敏  
【摘要】:目的:本研究建立新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)模型,通过检测不同时间点血清S100B蛋白水平,探讨血清S100B蛋白的表达在新生SD大鼠缺氧缺血性脑病中的早期诊断价值,同时探索S100B蛋白在新生SD大鼠缺氧缺血性脑病后的出现时间、出现峰值时间及消失时间,从而进一步为临床新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿的早期诊断及确定HIE后S100B蛋白最佳采血时间提供实验依据。方法:清洁级,封闭群,健康新生7日龄SD大鼠168只,雌雄不限,体重12~18g,随机分为3组:假手术组,HIBD模型组,健康对照组,每组各56只,HIBD模型组采用改良Rice法制备HIBD模型。根据动物处死时间不同HIBD组又随机分为7个亚组:0h组、6h组、12h组、24h组、48h组、72h及96h组,每亚组各8只。假手术组及正常对照组也在相应时间点分为7组,每组8只。各组大鼠在相应的时间点断头取血后处死,收集血液及脑组织标本。观察各组运动行为学变化、脑组织形态学变化及HE染色;双抗夹心ELISA法检测血中S100B蛋白的变化。结果:(1)7日龄SD大鼠在HIBD组建模后出现不同程度的行为异常,正常对照组与假手术组鼠未见异常行为(2)正常对照组、假手术组脑组织外观正常,两侧对称,无水肿、萎缩及坏死;HIBD模型组在建模后各时间点肉眼观脑组织大体形态出现不同程度的异常改变(3)HE染色:正常对照组、假手术组脑组织和HIBD模型组在建模后0h脑细胞层次清楚、细胞形态正常;HIBD模型组在建模后6h出现不同程度的神经细胞水肿、变性;12h、24h脑组织出现淤血水肿和血管充血;48h、72h神经细胞出现不同程度的坏死,细胞核碎裂、溶解;96h细胞出现大片状,细胞核碎裂、溶解。(4)血清中S100B蛋白的表达:HIBD组0h时间点组与正常对照组、假手术组比较血清中S100B蛋白差异无统计学意义(P0.05);HIBD组(0h、96h时间点组除外)、与正常对照组、假手术组比较各个时间点血清中S100B蛋白值显著升高(P0.05),差异有统计学意义;HIBD组48h时间点组分别与HIBD组6h、12h、24h、72h时间点组比较血清中S100B蛋白值显著升高(P0.05),差异有统计学意义;HIBD组6h、12h、24h、72h时间点组组间比较血清中S100B蛋白值差异无统计学意义(P0.05)。正常对照组、假手术组、HIBD组血清中S100B蛋白含量在0h为18.89±4.68ng/L、15.21±3.27ng/L、14.39±5.68ng/L;6h分别为17.36±1.24ng/L、15.77±1.59ng/L、27.61±6.30ng/L;12h分别为16.32±2.33ng/L、15.39±0.96ng/L、21.93±5.53ng/L;24h分别为17.01±1.66ng/L、15.12±1.10ng/L、24.65±4.83ng/L;48h分别为18.33±1.99ng/L、15.45±1.78ng/L、44.25±4.12ng/L;72h分别为18.47±1.85ng/L、15.21±1.94ng/L、28.39±4.53ng/L;96h分别为17.61±2.57ng/L、15.40±0.99ng/L、17.01±2.56ng/L结论:(1)新生大鼠缺氧缺血性脑病模型建立成功。(2)S100B蛋白可作为新生大鼠缺氧缺血性脑病早期诊断的生化指标。(3)新生大鼠缺氧缺血性脑病血清中S100B蛋白在缺氧缺血发生后6小时开始升高,48小时达到峰值,72小时开始下降。


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