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隐丹参酮对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的影响及其机制研究

周杨  
【摘要】:研究背景:神经炎症和氧化应激在神经退行性疾病的发生发展过程中起着关键作用。严格调控炎症反应过程中的促炎和抗炎介质,可以避免或延缓神经退行性疾病的发生发展。脂多糖诱导的小胶质细胞活化被广泛应用于研究神经炎症相关性疾病的体外模型。活化的小胶质细胞可以通过激活转录因子NF-κB诱导一些促炎蛋白酶(如诱导性一氧化氮合酶和环氧化物酶-2),从而触发某些炎性介质的释放(如一氧化氮,肿瘤坏死因子-α,白细胞介素-1β和白细胞介素-6)。但过度产生的炎性介质可以引起神经元变性死亡,最终促使神经退行性疾病的发生和进展。因此,控制小胶质细胞的过度激活可能是治疗神经炎症相关的神经退行性疾病的一个潜在的治疗方向。隐丹参酮是一种从中药丹参中提取的天然成分,已被确定为具有抗炎抗氧化应激作用。有研究表明,隐丹参酮可以抑制巨噬细胞中脂多糖激活的NF-κB和环氧化物酶-2的活性;可以抑制内皮素-1的表达,改善炎症反应。对于小胶质细胞,隐丹参酮是否仍可以抑制其炎症反应以及其中的机制,报道少见。目的:观察隐丹参酮是否可以抑制脂多糖诱导小胶质细胞的炎症反应并探讨其潜在的通路传导机制。方法与结果:1.采用乳酸脱氢酶方法检测细胞活力,确定隐丹参酮作用于BV-2小胶质细胞的安全浓度;2.一氧化氮试剂盒检测细胞上清NO水平;3.RT-PCR检测细胞中炎症因子(TNFα、IL1β、IL6)水平;4.Western blot检测细胞中iNOS、COX2、NF-κB、Nrf2和HO-1蛋白水平;5.免疫荧光检测细胞中NF-κB、Nrf2和HO-1蛋白活性水平;6.采用siRNA细胞转染技术验证隐丹参酮是否通过调控Nrf2/HO-1通路抑制神经炎症反应。结果:1.1-10μmol/L隐丹参酮对细胞无毒性,为方便实验操作,因此选择5和10μmol/L作为隐丹参酮的有效浓度;2.隐丹参酮能够抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞NO的分泌;3.隐丹参酮能够抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞TNFα、IL1β、IL6炎症因子的分泌;4.隐丹参酮能够抑制BV-2小胶质细胞iNOS、COX2、NF-κB的表达,能够增加Nrf2和HO-1的表达;5.隐丹参酮能够抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的活性,能够增强Nrf2和HO-1蛋白活性;6.隐丹参酮抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞的炎症反应依赖于Nrf2/HO-1通路。结论:隐丹参酮通过激活Nrf2/HO-1通路抑制小胶质细胞炎性细胞因子的产生,从而发挥神经保护作用。


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