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“Cocktail”探针药物法评价新藤黄酸对大鼠肝微粒体细胞色素P450不同亚型酶体内外代谢活性的影响

陈伟  
【摘要】:1目的采用“Cocktail”探针药物法评价新藤黄酸对大鼠肝微粒体细胞色素P450不同亚型酶CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4体内外代谢活性的影响,为新藤黄酸的开发应用提供一定的参考。2方法体外试验中选择茶碱、双氯芬酸钠、奥美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗和咪达唑仑分别作为CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4的探针底物制备成“Cocktail”混合溶液,并建立同时测定肝微粒体中探针药物的高效液相色谱检测方法。实验分四组进行:实验组(新藤黄酸组)、抑制剂对照组、空白对照组和无活性组,实验组采用大鼠肝微粒体孵育体系、探针药物和新藤黄酸;抑制剂对照组加入不同亚型对应的特异性抑制剂;空白组加入等体积空白溶剂(DMSO);无活性组不加NADPH再生系统,每组实验平行三个样本。检测大鼠肝微粒体中探针底物的剩余量,进而求酶活性百分数,使用Graph Pad Prism 5.0软件按非线性回归,将酶相对活性对新藤黄酸浓度的对数值作图,并计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。评价新藤黄酸在体外对CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4酶代谢活性的影响。体内试验中同样地选择茶碱、双氯芬酸钠、奥美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗和咪达唑仑分别作为CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4的探针底物制备成“Cocktail”混合溶液,同时建立测定大鼠体内探针药物的血药浓度的高效液相色谱检测方法。采用SD雄性大鼠,分为实验组和空白组。实验组每天清晨按2mg·kg~(-1)的剂量尾静脉给予新藤黄酸溶液,空白组每日清晨按1m L·kg~(-1)的剂量尾静脉给予空白溶剂,均连续给药7天。第7天清晨尾静脉注射后30min腹腔注射探针药,除咪达唑仑按10mg·kg~(-1)的剂量给药,其余均按20mg·kg~(-1)的剂量给药。于给药后0.083、0.17、0.25、0.5、1、2、4、8h眼眦静脉丛采血。测定大鼠体内探针药物的血药浓度。经DAS2.0软件计算探针药物的药代动力学参数,通过对比实验组和空白组的药动学参数,评价新藤黄酸在大鼠体内对CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4酶代谢活性的影响。3结果体外试验:建立的高效液相色谱方法,可以同时测定6种探针药物茶碱、双氯芬酸钠、奥美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗和咪达唑仑在肝微粒体中的浓度,各吸收峰分离完全,线性关系良好,准确度、精密度及稳定性均符合生物样本检测要求,操作简便。分别以不同浓度新藤黄酸溶液和大鼠肝微粒体共同孵育,结果显示,CYP450六种亚型酶的活性随着新藤黄酸浓度的增加而下降,新藤黄酸对CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4的IC50值分别为4.18、45.61、10.02μmol·L-1,对CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1的IC50值均大于100μmol·L-1。体内试验:建立的高效液相色谱方法,可以同时测定6种探针药物茶碱、双氯芬酸钠、奥美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗和咪达唑仑在大鼠体内的血药浓度。各吸收峰分离完全,线性关系良好,准确度、精密度及稳定性均符合生物样本检测要求,操作简便。同空白组相比,实验组茶碱、双氯芬酸钠、奥美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗和咪达唑仑的主要药动学参数t1/2、Tmax、Vd、MRT(0-t)、CL、Cmax、AUC(0~t)和AUC(0~∞)均无显著性差异。4结论新藤黄酸体外对CYP2C19酶活性有中等抑制作用,对CYP3A4酶活性有弱抑制作用,但对CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1酶活性没有抑制或诱导作用。新藤黄酸在体内对CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2E1、CYP2D6和CYP3A4酶活性无影响。


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