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贝母药材中生物碱及核苷类成分的定量分析研究

朱林  
【摘要】:目的:运用现代分析组合技术全面研究贝母药材,考察不同贝母药材中核苷类成分和生物碱类成分的分布特征,比较种间的差异,为贝母药材的鉴别和质量控制提供重要保证。探讨不同检测器对生物碱类成分分析的优缺点,为贝母药材的研究提供新思路和方法。方法:1.运用HPLC-DAD法对贝母药材中核苷类成分进行含量测定。2.通过HPLC-ELSD法和HPLC-CAD法对贝母药材中生物碱类成分进行含量测定,并比较不同检测器之间的差异性。3.使用SPSS数据分析软件对样品定量结果进行聚类分析。结果:1.通过对HPLC-DAD法色谱条件的摸索,确定了最佳实验方案,色谱柱为Thermo Hypersil GOLD色谱柱,甲醇-水为流动相,梯度洗脱,进样量20μL,柱温25℃,流速1 mL.min~(-1),DAD检测器检测波长:260 nm。9种核苷类成分的回收率均在95%~105%之间,RSD均在2%以内。得出9种核苷类成分的含量,9种核苷类成分在在不同种贝母药材中均有分布且差异不明显。2.通过对提取方法的考察,最终确定了生物碱提取方法为氨水浸润碱化2h,三氯甲烷:甲醇(4:1)作为提取溶剂,加热回流2h。对HPLC-ELSD法色谱条件的摸索,确立最佳的实验方案,色谱柱为Thermo Hypersil GOLD色谱柱,流动相为0.08%二乙胺-乙腈,梯度洗脱,进样量20μL,柱温35℃,流速1 mL.min~(-1),ELSD检测器参数:载气流速为2.5L.min~(-1),漂移管温度为105℃。5种生物碱成分的回收率均在95%~105%之间,RSD均在2%以内。得出贝母辛、西贝母碱苷、西贝母碱、贝母素甲、贝母素乙5个成分的含量,并通过聚类分析找出不同贝母药材间的区别。3.通过对HPLC-CAD法色谱条件的摸索,确立了最佳实验方案,色谱柱为ZORBAX SB-C18色谱柱,流动相为0.1%三氟乙酸-乙腈,梯度洗脱,进样量10μL,柱温30℃,流速1 mL.min~(-1),电雾式检测器参数:雾化温度35℃,气源为液氮、压力4.206×10~5Pa。5种生物碱成分的回收率均在95%~105%之间,RSD均在2%以内。得出贝母药材的西贝母碱苷、西贝母碱、贝母辛、贝母素甲、贝母素乙的含量,并对含量结果进行聚类分析,从而鉴别不同贝母药材。4.不同检测器(ELSD检测器与CAD检测器)对同样5种生物碱的含量测定结果基本一致,但作为不常用的新型CAD检测器,其灵敏度有优势,稳定性更好,定量限更低,可以检测到ELSD检测不能定量的物质或未能检测到的物质。结论:通过以上研究,HPLC-DAD法的含量测定结果进行分析,得出9种核苷类成分为8种贝母药材的共有成分,且含量在种间差异不大,可能为不同贝母药材的共性和规律性;利用对HPLC-ELSD法的含量测定结果进行研究,得出8种贝母药材的5种生物碱成分含量不同,通过聚类分析结果及后期分析研究,初步可以用此方法对贝母药材进行鉴别;利用新型CAD检测器对8种贝母药材的5种生物碱成分进行含量测定,更加准确可靠的得到5种生物碱成分在药材中的分布情况,结合聚类分析的结果更清晰的将不同贝母药材进行区分,同时得出CAD检测器更加适用于贝母中生物碱类成分定量分,为贝母药材的质量控制提供了新思路和方法,为临床安全用药提供了重要依据;通过上述现代分析组合技术,可全面分析贝母药材并为其质量控制提供可靠手段,保障市售贝母药材质量和临床的用药安全。


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