收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

变构核酸适体探针在DNA激酶—磷酸酶高灵敏检测中的应用

高铭暄  
【摘要】:核酸适体是通过指数富集的配体系统进化技术——SELEX筛选出的对于特定的靶标分子具有高特异性与亲和性的单链寡核苷酸序列。而变构核酸适体探针则是利用了核酸适体的高特异性高亲和力,并结合仿生变构效应设计出的可对各类靶标如离子、有机小分子、蛋白甚至细胞、组织等进行高灵敏生物分析检测的DNA分子探针。变构核酸适体探针具有灵敏度高、特异性强、受复杂的检测体系影响小、反应速度快等优点,并且可以根据不同的设计,定制化检测多种类型的靶标,体系兼容性强,应用范围广。本文改进了传统的发夹型变构核酸适体探针,设计了两种新型的双链变构核酸适体探针,实现了对T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)以及碱性磷酸酶(ALP)两种生物酶分子的高灵敏检测,证明了新型变构核酸适体探针对DNA磷酸化过程中的激酶、磷酸酶的检测具有良好的应用前景与临床诊断价值。本文的工作主要包括两个方面。首先,我们设计了新型双链变构核酸适体探针,探针主要由两部分组成,一部分是带有荧光团修饰的链霉亲和素的核酸适体,另一部分是与核酸适体相互补的DNA序列(cDNA)。我们将设计好的变构核酸适体探针应用于T4多聚核苷酸激酶的检测中,当体系中存在靶标分子时,变构核酸适体探针的cDNA的5'-OH基团被T4 PNK磷酸化,体系中的λ核酸外切酶识别磷酸基团后将cDNA降解,探针发生变构效应恢复核酸适体结构并与修饰有链霉亲和素的微珠相结合,使得微珠发出荧光,通过检测荧光信号的强度,对T4多聚核苷酸激酶进行高灵敏度的定量检测。本检测体系最低检测浓度可低至0.01 U/mL。接下来我们又针对在生物体系中与T4多聚核苷酸激酶作用完全相反的碱性磷酸酶进行了变构核酸适体探针的设计与检测。我们采用了类似的设计思路与检测体系,双链探针由互补的链霉亲和素的核酸适体与5'磷酸化的cDNA构成,当体系中不存在靶标分子ALP时,体系中的λ核酸外切酶将识别磷酸基团并将cDNA降解,探针发生变构效应恢复核酸适体结构并与修饰有链霉亲和素的微珠相结合,使得微珠发出荧光;而当体系中存在ALP时,cDNA的磷酸基团被去磷酸化,使得cDNA的降解被抑制,从而抑制探针的变构效应以及荧光探针与微珠的结合。通过检测荧光信号强度减弱的程度,即可对碱性磷酸酶进行高灵敏度的定量检测。本检测体系的最低检测浓度可低至0.012 U/mL。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前14条
1 董丹华;;基于DNA模型的中国档案保护技术文化基因提取与分析[J];档案学通讯;2021年06期
2 张智杰;牛青山;;R语言在法庭科学DNA检验中的应用现状[J];中国法医学杂志;2021年06期
3 倪建鑫;严奉奇;郝春林;郭博昕;武国军;;成年结节性硬化症相关的肾血管平滑肌脂肪瘤患者外周血DNA测序的价值[J];现代肿瘤医学;2022年04期
4 徐凯红;严笑;杨澍君;张怡;牧启田;徐志娟;欧阳桂芳;;白花丹醌对白血病细胞DNA甲基转移酶的作用[J];浙江中西医结合杂志;2021年12期
5 黄蓬英;廖富荣;范群艳;柳训才;张晓婷;王雅馨;何金麟;徐敦明;;燕窝显微特征及基于DNA条形码的基源鉴别[J];食品安全质量检测学报;2021年23期
6 程慧;刘顺;黎波;黄玉兰;周涛;;基于DNA酶催化反应建立适配体比色法检测鸡蛋中氯霉素[J];食品与机械;2021年11期
7 钱宝珍,Jaya Shrivastava,Joanne P.Webster,贺晨;中国大陆日本血吸虫微卫星DNA的初步研究[J];中国血吸虫病防治杂志;2004年04期
8 于瀛龙;周姝婧;徐新建;朱翔杰;杨凯杰;陈道印;周冰峰;;贵州省东方蜜蜂微卫星DNA遗传分化与遗传多样性分析[J];福建农林大学学报(自然科学版);2017年03期
9 杨静;王鸥;;线粒体DNA突变导致甲状旁腺功能减退症的临床表现和分子机制[J];中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志;2021年05期
10 翁秀秀;刘婷;;羔羊瘤胃内容物微生物基因组DNA的提取方法比较[J];甘肃农业大学学报;2021年06期
11 杨航;胡南;张辉;丁德馨;;一种检测电芬顿体系下DNA损伤的电化学生物传感器的研制[J];南华大学学报(自然科学版);2020年06期
12 东晓玲;赵欣;吕鹏;赵丛苍;余翀;陈靓;刘铭;张雅军;;甘肃省礼县西山遗址出土马骨的DNA初步研究[J];南方文物;2020年04期
13 张灿;浦天宁;邓子新;刘建军;李利明;梁晶丹;汪志军;;次氯酸鉴定硫修饰DNA的方法[J];基因组学与应用生物学;2020年09期
14 孙稚成;孙兆法;段玉军;程斐;;碱解法快速提取菠菜基因组DNA方法的优化[J];中国农学通报;2020年36期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 Zhang Tong;Zhao Guoqiang;Liu Yanan;Wei Fengxiang;;The Mitochondrial DNA copy number acts as a biomarker in the pathological state[A];2021海峡两岸暨港澳精准医学青年博士论坛论文集[C];2021年
2 Pu Gao;;Virus-Mediated Restriction of cGAS-DNA Innate Immune Phase Separation[A];2021年全国生物相分离和相变学术研讨会论文集[C];2021年
3 潘雯斐;Vladimir Meshcheryakov;Vivien WANG;;Structural and kinetic study reveal the dynamic of NFκB:DNA recognition[A];第七届全国冷冻电子显微学与结构生物学专题研讨会论文集[C];2021年
4 汪福意;曾文娟;张燕燕;罗群;赵耀;;金属抗肿瘤药物损伤DNA的应答蛋白质组学研究[A];第十一届全国化学生物学学术会议论文摘要(第一卷)[C];2019年
5 Shuren Zhang;Xiaoyong Wang;Zijian Guo;;Platinum(Ⅳ) Prodrugs with DNA-Repair Protein in RCA-proficient Cancer Cells as Major Target[A];第十一届全国化学生物学学术会议论文摘要(第二卷)[C];2019年
6 裴羽丰;刘雅君;谢春雨;张兴华;游慧娟;;阿霉素共价交联DNA的抗癌机制的单分子研究[A];第十一届全国化学生物学学术会议论文摘要(第二卷)[C];2019年
7 宋世平;;基于DNA纳米传感界面和表观遗传学变化的癌症早期诊断[A];中国化学会第二十届全国有机分析及生物分析学术研讨会论文摘要集[C];2019年
8 宋世平;;基于DNA纳米传感界面和表观遗传学变化的癌症早期诊断[A];中国化学会第二十届全国有机分析及生物分析学术研讨会论文摘要集[C];2019年
9 张雄;周翔;;基于近红外荧光小分子检测DNA中8-氧鸟嘌呤[A];第十一届全国化学生物学学术会议论文摘要(第二卷)[C];2019年
10 刘维映;曹易懿;尤馨悦;奚晶;栾洋;;FTO与DNA损伤应答[A];中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会论文摘要集[C];2020年
11 逄寒;张宏;徐晓文;姜玮;;具有新型运行方式的DNA步行器构建及病毒片段检测应用[A];中国化学会第二十届全国有机分析及生物分析学术研讨会论文摘要集[C];2019年
12 王振刚;;DNA/天然多糖自组装构筑仿酶材料及其协同催化行为研究[A];中国化学会第十七届全国胶体与界面化学学术会议论文(摘要)集(第一卷)[C];2019年
13 薛培;周艳;;DNA光解酶催化修复环丁烷嘧啶二聚体的机理研究[A];2019中国化学会第十五届全国计算(机)化学学术会议论文集[C];2019年
14 赵丽;张忠慧;何鹏;张晓茹;宋维玲;;基于聚集诱导发光和无模板DNA聚合的DNA甲基转移酶活性检测[A];第十一届全国化学生物学学术会议论文摘要(第二卷)[C];2019年
15 赵宇;接贵芬;;三向DNA连接结构与酶联动放大相结合,通过智能DNA步行器对microRNA进行超灵敏电化学发光检测[A];第十一届全国化学生物学学术会议论文摘要(第二卷)[C];2019年
16 熊军;刘飞龙;冯钰锜;袁必锋;;基于色谱-质谱联用分析的核酸修饰研究[A];中国化学会第22届全国色谱学术报告会及仪器展览会论文集(第一卷)[C];2019年
17 尹俊发;陈少坤;张宁;汪海林;;核酸快速酶切及DNA损伤分析的色谱-质谱新方法研究[A];中国化学会第22届全国色谱学术报告会及仪器展览会论文集(第一卷)[C];2019年
18 Yunlong Wang;Ruimin Wang;方亚平;Shengsong Xie;;The functional study of non-coding elements by integrating of 3D and 1D genome information[A];2019中国化学会第十五届全国计算(机)化学学术会议论文集[C];2019年
19 任路瑶;郑媛婷;侯湾湾;杨竞成;董莲华;郁颖;苏振强;王晶;石乐明;;中华家系1号DNA标准物质的研制与应用[A];2019中国化学会第十五届全国计算(机)化学学术会议论文集[C];2019年
20 朱本占;;如何将膜不通透的“DNA光开关”钌多吡啶络合物靶向到活细胞核?[A];第十一届全国化学生物学学术会议论文摘要(第一卷)[C];2019年
中国博士学位论文全文数据库 前20条
1 王博源;环境DNA损伤模拟物诱导下的p53~(N236S)转录与表达调控谱及p53~(N236S)对p19~(ARF)和PI3K通路调的研究[D];昆明理工大学;2018年
2 王路;利用DNA条形码与形态相结合的方法对亚历山大塔玛复合种和夜光藻的内共生绿藻进行系统分类学研究[D];厦门大学;2017年
3 郑心如;DNA双链断裂修复调控蛋白筛选及调控机制研究[D];厦门大学;2017年
4 李根;转录因子与DNA特异性识别机制的分子动力学模拟研究[D];华中农业大学;2019年
5 别丽华;bZIP转录因子与DNA相互作用中甲基化调控机制的分子模拟[D];华中农业大学;2018年
6 刘雨双;基于DNA链置换反应动力学和GFET对DNA甲基化的检测[D];内蒙古农业大学;2019年
7 刘轲;基于DNA纳米技术与原子力显微镜高分辨成像的精准基因检测研究与应用[D];上海交通大学;2018年
8 张保柱;DNA适体基荧光金属纳米簇对金属离子及生物分子的turn-on检测[D];山西大学;2019年
9 李锦;基于螺吡喃分子开关的G—四链体DNA荧光探针的构建与应用研究[D];西北大学;2019年
10 郭斌;基于DNA自组装纳米结构的生物传感新方法研究[D];重庆医科大学;2019年
11 周晓燕;基于功能性DNA纳米结构的等温扩增检测方法研究[D];重庆医科大学;2019年
12 李新;载多柔吡星DNA自组装纳米折纸对人卵巢癌靶向治疗的实验研究[D];武汉大学;2016年
13 刘升;酵母DNA损伤响应中ATR激酶及其相关复合物的结构研究[D];中国科学技术大学;2019年
14 Hafiz Muhammad Zakria;酵母呈递的肌生长抑素和白介素21基因DNA疫苗对小鼠体重和免疫系统的影响[D];西北农林科技大学;2018年
15 李翔;级联循环和酶催化下的DNA反应网络[D];中国科学技术大学;2019年
16 卢沙沙;DNA纳米技术在生物传感及智能水凝胶中的应用[D];中国科学技术大学;2019年
17 谢斯思;基于TALE组装的DNA支架增强外源多酶代谢通路[D];国防科技大学;2018年
18 丁健生;基于母子细胞系及其酶消化的胎儿染色体非整倍体无创产前检测游离DNA参考物质的研究[D];北京协和医学院;2019年
19 管莎莎;肿瘤及外周血循环DNA检测在转移性胰腺癌中的临床应用价值[D];中国人民解放军医学院;2019年
20 王暾;应用于DNA分子电检测的碳纳米管和石墨烯薄膜谐振器件研究[D];厦门大学;2017年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 李涛;DNA甲基化差异性表达在预测早期胃癌淋巴结转移中的作用[D];南方医科大学;2021年
2 王壹;几种原核DNA解旋酶重组表达及其活性研究[D];长春理工大学;2021年
3 钱茜茜;基于DNA条形码不同地理株白纹伊蚊及其亚组的分子鉴定研究[D];福建医科大学;2016年
4 荣广玉;以DGL为载体的禽流感DNA疫苗的制备及其免疫机制研究[D];黑龙江大学;2016年
5 潘俊慧;二价禽流感DNA疫苗的构建及免疫效力评估[D];中国农业科学院;2018年
6 陈玉;基于DNA三臂交联结构和抗菌药物调控的电化学发光生物传感器研究[D];西北大学;2020年
7 陈哲;基于DNA计算的可满足性问题的模型研究[D];安徽理工大学;2020年
8 汪改英;基于DNA和限制酶的逻辑计算模型的研究[D];厦门大学;2019年
9 闫晓珊;生物计算中病毒机模型和DNA逻辑电路的研究[D];厦门大学;2019年
10 刘雅思;广东省珍稀植物DNA条形码与分子鉴定[D];仲恺农业工程学院;2019年
11 高铭暄;变构核酸适体探针在DNA激酶—磷酸酶高灵敏检测中的应用[D];厦门大学;2019年
12 肖代琴;以DNA origami为模板的氧化铪纳米粒子的制备[D];厦门大学;2019年
13 王静文;酶辅助构建DNA纳米结构及其在无机纳米材料合成中的应用研究[D];厦门大学;2019年
14 周玉洁;基于DNA纳米机器和纳米材料的生物传感新方法[D];湖南大学;2019年
15 张亚;锌依赖的DNA结合蛋白家族基因OsPLATZ的功能研究[D];华南农业大学;2018年
16 张春连;芳杂环—铜(Ⅱ)-葡萄糖酸/氨基酸配合物的合成、性能及应用研究[D];华南农业大学;2018年
17 沈芳;三元混配铜(Ⅱ)配合物的DNA/HSA结合作用及细胞毒性研究[D];华南农业大学;2017年
18 刘媛媛;DNA水凝胶的制备及载药性能研究[D];福建中医药大学;2020年
19 王博;火炬松线粒体DNA全序列分析[D];华南农业大学;2018年
20 张友;H5亚型禽流感DNA疫苗及禽用免疫增强剂研制[D];华南农业大学;2018年
中国重要报纸全文数据库 前20条
1 黄辛;DNA骨架硫修饰研究又获新成果[N];科学时报;2011年
2 本报记者 辛明;邓亚军:灾难现场的DNA斗士[N];中国青年报;2011年
3 本报记者 欧阳晓红 韩宋辉;“可怕”的友邦DNA 267亿港元净利从何而来[N];经济观察报;2015年
4 本报记者 陈晨;站在DNA损伤应答研究前沿[N];科学时报;2010年
5 杨涛;邮票上又见“DNA”[N];中国集邮报;2021年
6 记者 刘霞;“月球方舟”拟储存六百七十万个物种DNA[N];科技日报;2021年
7 南方日报记者 王佳欣 实习生 杨婉馨;广东省优秀共产党员刘超:破译DNA密码 还原疑案真相[N];南方日报;2021年
8 实习记者 于紫月;寻找治癌“灵丹妙药” 染色体外环状DNA或是关键所在[N];科技日报;2020年
9 记者 张家伟;英研究称可基于DNA评估预期寿命[N];新华每日电讯;2019年
10 通讯员 王彤 顾镔彬 融媒体记者 李都;江北新区:“数据DNA计划”发布[N];南京日报;2020年
11 本报记者 陈曦;未来给你做手术的也许是DNA纳米机器人[N];科技日报;2020年
12 深圳特区报首席记者 孙锦;解读DNA惠及世界患癌儿童[N];深圳特区报;2018年
13 记者 冯卫东;DNA分子计算为可编程药丸铺路[N];科技日报;2018年
14 本报记者 李禾;DNA折纸术,“折”出生命所需神奇图案[N];科技日报;2019年
15 记者 刘霞;美日创建迄今最大DNA基因模型[N];科技日报;2019年
16 任芳言;古DNA揭示马的身世[N];中国科学报;2019年
17 记者 冯卫东;基因剪刀剪切DNA过程首次捕获[N];科技日报;2019年
18 本报记者 马爱平;基因编辑应用前景好 但自行改变DNA不现实[N];科技日报;2019年
19 本报记者 陆成宽;DNA到底能不能预测外貌[N];科技日报;2018年
20 记者 刘霞;人体细胞内存在全新DNA结构[N];科技日报;2018年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978