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文昌鱼应激反应的蛋白质组学及creatine kinase的免疫功能研究

高媛媛  
【摘要】: 由于文昌鱼在进化上的特殊地位,近年来成为众多免疫学家研究的热点。通过研究文昌鱼自身免疫的特点,寻找文昌鱼免疫相关因子,尤其是适应性免疫的分子,进一步揭示适应性免疫如何起源和进化,具有重要的意义。本文以厦门海域文昌鱼为研究材料,运用蛋白质组学、免疫学、分子学生物学等研究方法,对文昌鱼五种应激免疫反应进行研究,筛选和鉴定了多种和文昌鱼免疫相关的蛋白,并对其中最重要的肌酸激酶(creatine kinase,CK)在抵御病原菌感染中的作用进行了深入研究。 在国内外首先采用差异蛋白质组学技术,研究了文昌鱼对盐度、皮肤划伤应激和对细菌感染、免疫攻毒等的体液或肌肉蛋白质组,发现了差异变化蛋白,探讨了其免疫保护特征,旨在初步阐明文昌鱼免疫进化特点。通过比较分析上述文昌鱼免疫反应的试验结果,发现了文昌鱼15个免疫相关因子,其中ribosomalprotein S10,CAVPT,Cathepsin,Intermediate filament protein以及CK在多种免疫反应中表达都发生变化,对进一步确定文昌鱼相关免疫因子具有重要的参考价值。特别重要的是,CK在双向电泳图谱中表现为11种不同形式的蛋白点,位于酸端的CK1的变化最为显著,值得进一步研究。 通过Western blotting检测和酶活力测定,进一步证明割伤后体液中CK的酶活力和蛋白含量都有一个先升高再恢复的动态变化过程,说明CK是一个典型的APP。此外,通过对文昌鱼CK的克隆测序分析和磷酸化分析,探讨了CK在双向电泳图谱中表现形式的多样性的原因,推测这种多样性不是由基因多样性造成,而是由翻译后修饰造成的。 通过pull-down试验证明,文昌鱼体液中的CK蛋白可以和多种细菌结合。纯化的原核表达CK可以使多种菌凝集,进一步证明了这种结合是一种直接的相互作用。通过酶活力测定发现,细菌菌体结合CK后能抑制其酶活力。不同菌对CK结合抑制能力不同,并且这种影响呈剂量效应。Far-western blotting和Co-IP试验证明了大肠杆菌通过OmpA,OmpX,OmpW三个外膜蛋白和CK直接结合。三个蛋白在Ecoli BW25113与突变株△OmpA,△OmpW和△OmpX的含量不同,并且对CK的影响能力也不同:OmpA和OmpW在菌体中含量大,对CK活力的抑制作用比较强,而OmpX的含量相对比较少,并且没有抑制作用。因此,Ecoli BW25113与突变株△OmpA,△OmpW和△OmpX对CK的结合能力和对其活力的抑制作用不同。Far-Western blotting的结果显示,OmpA和OmpW都同时和CK的两个结构域domainC及domainN结合,而OmpX仅和domainC结合,这可能是导致OmpX不能抑制CK酶活力的原因。 RNA干扰试验说明,CK在文昌鱼抵御病原菌侵入方面有重要的作用。不同浓度的副溶血弧菌感染文昌鱼的试验和抑菌试验的结果表明,一定浓度的CK只能抑制一定数量的病原菌的生长,如果菌数目过多则不能达到抑制的目的。因此,我们推测文昌鱼的CK在抵御病原菌入侵的时候,既有识别功能,也具有一定抑菌作用。


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1 张健;林丹军;骆嘉;;文昌鱼人工催产简报[J];福建师范大学学报(自然科学版);1985年03期
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3 蔡燕宁;;“脊索动物门”的教学[J];生物学通报;1985年11期
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6 郭仁强;金德祥;;中国厦门的文昌鱼[J];生物学通报;1953年12期
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9 长流;没有头、眼、鼻、耳的鱼——文昌鱼[J];科学养鱼;1986年02期
10 宋裕昌,许梅青;青岛文昌鱼的繁殖生物学——Ⅰ.卵巢和卵母细胞发育的观察[J];海洋科学;1989年04期
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12 蔡英亚,刘志刚,张志强,邓陈茂;北部湾的文昌鱼[J];热带海洋学报;1986年02期
13 方永强,U.Welsch;文昌鱼卵巢中滤泡细胞超微结构及功能的研究[J];中国科学B辑;1995年10期
14 邱辉煌;文昌鱼研究获新进展[J];台湾海峡;1987年03期
15 张致一;生殖内分泌的演化[J];动物学报;1982年03期
16 方永强;丘脑下部促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)对文昌鱼精子发生的影响:组织学及其超微结构的研究[J];动物学报;1985年04期
17 方永强,齐襄;文昌鱼哈氏窝上皮细胞超微结构的研究[J];中国科学B辑;1989年06期
18 刘辉;叶湘漓;;文昌鱼抗金葡菌感染差减文库的构建及免疫相关基因分析[J];中国生物化学与分子生物学报;2009年08期
19 金德祥;;文昌鱼[J];科学大众(中学版);1956年03期
20 林加涵,陈细法,汪德耀;文昌鱼精子发生过程中的超微结构研究[J];海洋与湖沼;1987年05期
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1 谭俊;许强华;;日本文昌鱼transcription factor AP-1基因的克隆和表达[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
2 江守文;许强华;郑英慧;陈良标;;日本文昌鱼雌雄差异microRNA的筛选与鉴定[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 王昌留;张士璀;;文昌鱼染色体C和NOR带型的研究[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
4 邵荣光;;抗感染抗体药物的研究进展[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
5 王昌留;张士璀;;文昌鱼染色体核型及G和R带型的研究[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年
6 韩俊峰;王书峰;谢谆怡;吴玉章;;microRNA在免疫系统中的作用[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
7 王勇;郎刚华;张均顺;徐永立;张培军;;文昌鱼同源框基因的研究进展[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年
8 陈维;;文昌鱼SOX9基因的克隆与分析[A];遗传学与社会可持续发展——2010中国青年遗传学家论坛论文摘要汇编[C];2010年
9 沙诗宇;侯林;马飞;;文昌鱼不同发育阶段miRNA及靶标的比较分析[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年
10 方永强;黄威权;陈蕾;张金山;;促性腺激素释放激素和GnRH mRNA在文昌鱼性腺中的定位及其表达[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
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1 高媛媛;文昌鱼应激反应的蛋白质组学及creatine kinase的免疫功能研究[D];厦门大学;2007年
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1 胡立彪;市场免疫机制不可或缺[N];中国质量报;2008年
2 本报记者 沈昀;免疫系统炎症性疾病存认识盲点[N];南方日报;2007年
3 古月;美发现HIV侵犯人体免疫系统的奥秘[N];中国医药报;2006年
4 肖东;增强免疫力小妙方[N];中国中医药报;2008年
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