收藏本站
收藏 | 论文排版

自养小球藻(Chlorella autotrophica)多糖提取、纯化、化学结构及抗菌活性研究

刘四光  
【摘要】: 独特的海洋环境中,存在着具有药用价值的新颖结构化合物。本研究选取了一种广泛分布的经济藻类—自养小球藻(Chlorella autotrophica)为研究对象,优化提取其硫酸多糖,对所得粗产物分离纯化流程进行了研究。通过化学方法阐明了其化学组成及结构,并对其抑菌活性做了初步探讨。 自养小球藻属于绿藻门(Chlorophyta)绿球藻目(Chlorococcales)卵囊藻科(Oocysteceae)小球藻属(Chlorella),是一种广泛分布的海洋微藻。在超声辅助提取法中,我们选用了0.01 mol/L的HCl、纯水及4 % NaOH为提取介质,在超声破碎10 min,重复2次,超声功率300 W,频率20 kHz,超声脉冲持续时间9.9 s,等待时间3.3 s,并80℃下水浴1 h条件下取得的粗多糖产率均高于传统热水浸提法所得的粗多糖产率。其中以4 % NaOH介质提取得到的多糖产率最高为120.2 mg/g (粗多糖/干藻粉)。对微波辅助提取方法建立正交实验,以提取温度、时间、提取介质pH及微波功率为因子,发现影响粗多糖产量因素为提取时间提取温度提取溶液pH微波功率,并且在70℃、提取时间30 min, pH=7和功率为600 W条件下粗多糖的产率最高,为291.13 mg/g (粗多糖/干重),高于传统热水浸提法粗多糖产率7.85 %。超声辅助提取法及微波辅助提取法所得的多糖粗产物与传统热水浸提法所得的多糖粗产物对比发现其结构差异不明显,说明这两种提取方法是安全可靠的。 采用凝胶色谱法对以超声辅助提取法中所得的粗多糖进行分离纯化研究。结果显示,DEAE-Sepharose Fast Flow具有载量大,流速快的优点,相较分子排阻型凝胶更适合对所得的多糖粗产物进行初分离。在对粗多糖产物进行分离时得到PCA1、PCA2和PCA3 3个组分,以琼脂糖电泳及HPFGC法对这3个组分的纯度进行研究,结果显示PCA1为单一纯品,PCA2、PCA3分别为硫酸多糖组成的混合物,其中PCA3组分多糖含量仅为33.75 %,且得率低、成分复杂,因此放弃对PCA3进一步研究。采用AKTA蛋白纯化系统,以Sephacryl S-400 HR分子排阻凝胶色谱对PCA2进一步分离得到PCA2-1和PCA2-2两个硫酸多糖,经鉴定为纯品。 采用HPGFC、FT-IR、GC-FID、GC-MS及NMR等手段对PCA1、PCA2-1及PCA2-2 3个组分的化学组成及结构做了进一步研究。实验结果表明,PCA1、PCA2-1及PCA2-2分子量分别为1.30×105、3.07×105、2.06×105;硫酸基含量分别为0.77 %、13.03 %、7.46 %。PCA1为均多糖,是由无支链的α-D-1,4吡喃葡萄糖连接构成其主链。PCA2-1是一种复杂的杂多糖,甲基化结果显示其具有分支结构,单糖组成为木糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖以1.97:1.49:1.00:1.92,连接方式为1,4-Glc,1,6-Gal,1,4-Man,1-Xyl,2,6-Man,2,4,6-Gal以0.9:1.0:1.0:0.4:0.4:0.7组成。PCA2-2同样为一杂多糖由鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖以0.15:0.22:0.21:1.00:1.36组成,甲基化及13C-NMR的结果未见其具有分支结构的单元,其主要由α-2,6-Galp和α-1,4-Glcp以2:1交替连接构成了该多糖主链结构。 由于样品获得有限,我们以样品浓度为0.2 mg/mL,分别进行了PCA2-1和PCA2-2两种硫酸多糖抑菌的初步实验。选取了4种在海洋环境中常见的菌种为对象,其中大肠杆菌抗生菌检定株(Escherichia coli)和解藻朊酸弧菌(Vibrio alginolyticus)为革兰氏阴性菌,表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)和溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus fleming)为革兰氏阳性菌。实验结果表明,PCA2-1对大肠杆菌抗生菌检定株和溶壁微球菌有一定的抑菌作用,KI值可达30 %以上,对表皮葡萄球菌和解藻朊酸弧菌没有抑菌作用;PCA2-2对溶壁微球菌和解藻朊酸弧菌有较强有抑菌作用,KI值可达70 %以上,对表皮葡萄球菌和大肠杆菌抗生菌检定株没有抑制任用。当从总体上来看,所得多糖的抑菌效果从杀伤指数KI来看,其值会随时间而呈现衰减的趋势。但PCA2-2在对解藻朊酸弧菌的抑制中具有稳定其较高的杀伤指数,值得进一步进行研究。 目前,国内外尚无有关自养小球藻中多糖的报道,本研究为首次对提取分离方法,化学组成结构及初步生物活性进行了研究。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 孙桂琳;王红丽;苟萍;田歆珍;;大蒜中生理活性物质对致病细菌的体外抑制作用[J];生物技术;2008年03期
2 董南;陈佩华;朱龙观;王益军;;稀土三氯醋酸盐与8-羟基喹啉(hoxine)配合物抑菌性能研究[J];科技通报;1993年03期
3 孟娜,周守标,蒋继宏;月腺大戟( Euphorbia ebracteolata)根部提取物抑菌作用的测定[J];生物学杂志;2005年04期
4 鲍敏;米琴;曾阳;;藏药雪灵芝不同提取物的体外抑菌作用实验研究[J];青海师范大学学报(自然科学版);2005年04期
5 杜银忠;;7种中药对乳源产β-内酰胺酶葡萄球菌的抑菌作用[J];青海大学学报(自然科学版);2007年06期
6 梁燕茹;李文权;刘四光;;自养小球藻硫酸多糖的红外光谱分析[J];海洋科学;2007年11期
7 何献君;张雪丹;吕光璞;尹芳;;芦荟抑菌作用的研究进展[J];实验技术与管理;2009年06期
8 李永仪;杨文庆;;激光抑菌作用的实验观察[J];郑州大学学报(理学版);1987年01期
9 马兴铭,李红玉,王波,尹少甫;西藏砂生槐生物碱抑菌及杀虫活性的测定[J];中国生物防治;2005年03期
10 王阳梦,何聪芬,董银卯;库拉索芦荟抑菌效果研究[J];北京工商大学学报(自然科学版);2005年05期
11 杜晓,李宁,周茹娟,王孝仕;植物中分离的儿茶素类及其聚合物的抑菌作用[J];四川农业大学学报;2005年03期
12 樊卫萍;吉顺福;;特殊土壤中霉菌抑菌作用的研究[J];绵阳师范学院学报;2006年05期
13 牛立新;靳磊;张延龙;郭秋菊;李红卷;;三种百合鳞茎提取物的抑菌作用[J];广西植物;2008年06期
14 刘剑;李晓眠;江勇;;EDTA对变异链球菌生长抑制和抗黏附作用研究[J];中国现代医学杂志;2008年22期
15 许荣誉;庄建良;张海云;;12株乳杆菌益生特性的研究[J];医学研究生学报;2008年12期
16 王丽丽;白方文;张西玉;陈晓敏;董桂灵;白林含;;杜仲内生真菌的分离鉴定及其抑菌活性研究[J];四川师范大学学报(自然科学版);2009年04期
17 闫晓梅,张双全,常青,刘平,徐进曙;江浙蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)毒的抑菌作用及其抑菌组分L-氨基酸氧化酶的分离纯化[J];实验生物学报;2000年04期
18 程珍,李冠,齐丽杰;麻叶荨麻籽抑菌成分和抑菌特性的研究[J];生物技术;2005年05期
19 吴翠萍;林清强;陈密玉;吴国欣;林文群;;宁德产小鱼仙草挥发油化学成分及抑菌作用的研究[J];福建师范大学学报(自然科学版);2006年01期
20 钟青萍;何艳萍;钟士清;葛萃萃;;抗痢疾志贺氏菌的特异性IgY的研究[J];中国食品学报;2006年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 谢小保;曾海燕;欧阳友生;陈仪本;;化妆品微生物挑战试验菌种的选择[A];第七届中国化妆品学术研讨会论文集[C];2008年
2 王四旺;孙纪元;谢艳华;李景峰;缪珊;;洋葱提取物的抗炎作用[A];中国制药工业药理学会20周年学术会议论文集[C];2002年
3 唐艳霞;孟祥春;林德球;;红花油渣粗提液对香蕉炭疽菌抑菌作用的初步研究[A];植物保护科技创新与发展——中国植物保护学会2008年学术年会论文集[C];2008年
4 朱显峰;张洪勋;卢莹;罗国添;;朝鲜蓟提取物的抑菌作用研究[A];微生物生态学研究进展——第五届微生物生态学术研讨会论文集[C];2003年
5 王建明;梁建根;陈燕飞;高俊明;张作刚;;辣椒素的抑菌作用及其对某些保护酶活性的影响[A];中国植物病理学会2005年学术年会暨植物病理学报创刊50周年纪念会论文集[C];2005年
6 张秀峰;;云芝多糖的体外抗微生物活性研究[A];吉林省畜牧兽医学会2007学术年会论文集[C];2007年
7 刘仁志;程桂林;段美玲;王宁;张琳;毛帅;刘凤华;许剑琴;;大蒜挥发油及其复方对猪胸膜肺炎放线杆菌体外抑菌作用[A];纪念《元亨疗马集》付梓400周年中国畜牧兽医学会中兽医学分会2008年学术年会华东区第十八次中兽医科研协作与学术研讨会暨兽药发展论坛论文集[C];2008年
8 张世奇;杨先乐;夏文伟;许佳露;周常;;20种中草药对水霉菌的抑菌作用研究[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
9 蔡光明;张新全;韩晋;魏振满;汤春玲;;复方蜂胶气雾剂的抑菌试验与安全性评价[A];中华中医药学会皮肤科分会学术会议、全国中医药防治皮肤病成果与技术交流大会、全国中西医结合皮肤科治疗新技术临床推广应用高级研修班文献汇编[C];2004年
10 李慧;白红彤;潘岩;霞秋香;姜闯道;石雷;;椒样薄荷与薰衣草精油的抑菌作用研究[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘四光;自养小球藻(Chlorella autotrophica)多糖提取、纯化、化学结构及抗菌活性研究[D];厦门大学;2007年
2 叶红;马尾藻多糖的分离纯化、生物活性及结构分析[D];南京农业大学;2008年
3 张朝燕;草叶马尾藻多糖的制备及其抗草酸钙结石作用研究[D];华东理工大学;2013年
4 白日霞;马粪海胆多糖的研究[D];大连理工大学;2010年
5 梁爱叶;肝素等硫酸多糖与粒细胞集落刺激因子等蛋白质在分子和细胞水平上的相互作用研究[D];中国科学院研究生院(大连化学物理研究所);2006年
6 黄皓;魔芋HOGS抗病毒特性及作用机理研究[D];华中农业大学;2008年
7 林长征;藻酸双酯钠的分级制备及其生物活性研究[D];中国海洋大学;2007年
8 马亚琴;超声辅助提取柑橘皮中黄酮、酚酸及其抗氧化能力的研究[D];浙江大学;2008年
9 赵峡;聚古罗糖醛酸硫酸酯及其寡糖的制备、结构与活性研究[D];中国海洋大学;2007年
10 刘涛;家蚕生物反应器表达人乳铁蛋白及其功能研究[D];浙江大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 贾少婷;鄂尔多斯螺旋藻多糖降血糖活性及对微生物作用的研究[D];内蒙古农业大学;2007年
2 曾晓芳;木芙蓉根提取物抑菌及抗肿瘤作用的初步研究[D];福建医科大学;2009年
3 贾晓红;苦豆子中苦参总碱的提取及纯化技术的研究[D];新疆农业大学;2005年
4 张红梅;花生衣红色素粗品的提取、性质及其应用的研究[D];江南大学;2005年
5 王军;治疗奶牛子宫内膜炎新药EDM的研制[D];吉林农业大学;2006年
6 田欢栋;双黄连粉针剂对产ESBLs大肠埃希菌的体外抑制作用的实验研究[D];北京中医药大学;2007年
7 王姝;抑制乙型溶血性链球菌和清除免疫复合物的中药研究[D];吉林农业大学;2008年
8 裴中艳;《肺炎合剂》对肺炎克雷伯菌肺炎抗炎、抑菌作用的实验研究[D];大连医科大学;2009年
9 邢海云;鸡β-防御素在大肠杆菌中的高水平表达及复性工艺研究[D];山西农业大学;2005年
10 郭晓;螺旋毛壳ND35β-1,3-葡聚糖酶的诱导、纯化及其抑菌作用[D];山东农业大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 江伟;铜抑菌作用为感染防控开辟新思路[N];中国医药报;2011年
2 记者 张东风;藏药翁布抑菌作用明显[N];中国中医药报;2006年
3 记者 胡德荣;表皮葡萄球菌可成为人体皮肤“卫士”[N];健康报;2010年
4 记者 姜澎;表皮葡萄球菌能抑制炎症[N];文汇报;2010年
5 蒋冰冰 记者 王春;我学者发现表皮葡萄球菌能有效抑制皮肤伤口炎症[N];科技日报;2010年
6 岳阳;表皮葡萄球菌能有效抑制皮肤炎症[N];中国医药报;2010年
7 本报记者 张倩;铜翅片抑菌:首现北京公交[N];机电商报;2008年
8 李运红胡颜;科学家从壁虎中分离出抗肝癌成分[N];新华每日电讯;2007年
9 刘道安通讯员 运红 胡颜;壁虎中分离出抗肿瘤活性成分[N];健康报;2007年
10 刘道安运红 胡颜;我国学者从壁虎中分离出抗肿瘤活性成分[N];中国医药报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978