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乙型肝炎病毒突变型表面抗原在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其免疫活性研究

杨炳春  
【摘要】: 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是严重危害人类公共健康的世界性问题。在我国,HBV携带者约占人口总数的10%,现患慢性乙型肝炎约3000万人。HBV的感染不仅能够引起急、慢性病毒性肝炎,而且部分感染者会发生肝硬化和肝细胞癌。病毒的基因变异与逃避机体免疫应答、出现耐药性、改变致病性和引起疾病流行等密切相关,研究病毒的基因变异对防治HBV感染有重要意义。乙型肝炎病毒S基因编码的HBsAg是当前乙肝疫苗的主要成分,也是HBV感染诊断的重要依据。抗-HBs抗体可用来预防肝移植后HBV的再感染和母婴垂直感染,但这有赖于HBsAg与抗-HBs抗体之间的相互作用。当HBsAg抗原性发生改变可直接影响HBV感染后的诊断和治疗。目前所知,S基因突变发生率最高的部位是表面抗原中第145位氨基酸(基因m587G→A)的甘氨酸→精氨酸的突变(G145R)。这种新的变异株可导致疫苗免疫失败、肝脏移植后HBV再感染和母婴垂直传播等,给乙肝防治带来了新的问题。现有HBsAg诊断试剂对G145R突变株感染病例的灵敏度不高,经常会有漏检案例导致误诊和血源性HBV传播。 本论文研究从一份献血员血清中分离到一株G145R突变的HBV病毒X119,设计S区引物从中扩增出S基因,利用杆状病毒表达系统进行变异型表面抗原(119s)的大规模表达。通过液相色谱和CsCl平衡梯度离心等手段对目的蛋白进行纯化,获得纯化的119s经透射电镜观察证明其可自发组装成病毒样颗粒。为考察表达的重组抗原的免疫原性,本研究用纯化后的119s抗原免疫小鼠,结果经119s免疫的小鼠产生了针对119s强烈的特异性免疫应答,而阴性对照组则无特异抗体产生,证明颗粒性的119s蛋白具有良好的免疫原性,可见重组杆状病毒表达系统表达生产的突变型sAg有望作为新乙肝疫苗的组成成分以提供对G145R突变株的保护。对纯化蛋白的抗原性分析发现其与野生型sAg对构象型单抗反应性差异显著,表明两者在构象上有很大不同,导致其对部分现有检测试剂的敏感度不高而易被漏检,利用基因工程重组抗原作为开发新检测试剂的筛选原料有望提高检测试剂对突变型HBV的检出率。


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