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大肠埃希氏菌K12胞浆盐调节蛋白和复合物组的研究

赵萍  
【摘要】: 胞浆蛋白在应对外界环境的变化中起着重要的作用。细菌外部环境的变化很多时候是以渗透压的变化的形式表现出来的。因而,研究细菌在不同渗透压条件下胞浆蛋白表达的差异就显得尤为重要,有助于进一步了解胞浆蛋白的作用机制以及胞浆蛋白在整个调控体系中所起的作用。 论文以模式生物大肠埃希氏菌K12为研究对象。首先是利用高通量、高分辨率的2-DE技术与高灵敏度的质谱技术联用,鉴定了在不同盐度条件下,大肠埃希氏菌K12差异表达的6种胞浆蛋白。接下来采用蛋白质组学、基因工程技术等研究方法,对上述6种蛋白在不同盐度条件下细菌表达的差异加以确认。 更重要的是,本文通过native/SDS-PAGE技术、质谱分析和对数据库的搜索,推测了3个大肠埃希氏菌K12胞浆盐调节蛋白的相关复合物。在接下来的实验中,采用了Western blotting、Far-Western blotting和免疫共沉淀等多种技术,对上述3个蛋白复合物中涉及的蛋白之间的关系作了一系列的研究。确认了Tig与GroL、RpsA,SodB与CysK及Mdh与UxaC的复合物关系。最后利用其高表达菌株和敲除菌株研究了它们对大肠埃希氏菌K12在不同盐度条件下生长的影响。 最后,论文采用基因工程技术克隆、表达、纯化了部分大肠埃希氏菌双组分调节系统蛋白,并制备了其抗血清。然后利用Western blotting技术,初步探讨了它们与大肠埃希氏菌K12在不同盐度条件下生长的相关性。发现PhoP、PhoR和RcsF在大肠埃希氏菌K12对不同盐度环境的适应中有一定的相关性。对进一步拓展对大肠埃希氏菌双组分调节系统功能的了解具有一定的意义。


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