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玉米赤霉烯酮毒素的HPLC分析技术研究与应用

高丽芳  
【摘要】:玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN),又名F-2毒素,是环境中镰刀菌属菌侏产生的毒素,可随着食物或其他方式进入动物体或通过动物排泄污染环境。分析动物体中痕量ZEN的残留水平及其分布,是开展ZEN从环境进入生物体后产生迁移的环境行为研究的重要组成。为此,本文基于液相色谱-荧光检测(HPLC-FLD)技术,从样品处理、在柱富集、多残留分离以及药代动力学等着手,建立了动物样品中痕量ZEN及代谢物的高灵敏分析技术,并建立了 ZEN在动物(兔)血浆中的药代模型及其组织中的残留分布数据。主要内容包括以下部分:第一章,文献综述。概述了玉米赤霉烯酮及其代谢物的性质、分析方法研究现状以及代谢动力学研究进展,总结提出了本论文的选题依据及研究方案。第二章,动物组织和血液样,品前处理技术研究。针对组织和血液样品中痕量ZEN分析时前处理效率较低的问题,围绕复杂样品中ZEN前处理中主要技术参数,系统考察了 ZEN在样品前处理中反萃取剂浓度、固相萃取柱上样速度、洗脱速度、洗脱剂类型、洗脱剂用量、氮吹温度以及定容溶剂等影响,优化了不同参数对ZEN测定回收率的影响,建立了玉米赤霉烯酮在动物组织和血液中残留的HPLC检测方法,ZEN检测限达1.0ng/g,肌肉和肝脏样品的ZEN加标回收率为72.6~75.5%、74.4~91.5%,血液中ZEN加标回收率为分别为74.2~94.0%。第三章,基于色谱区带压缩效应(CZSE),建立了痕量玉米赤霉烯酮(ZEN)在柱富集HPLC-FLD分析技术,进而建立了 ZEN及代谢物多残留的高灵敏连续分析技术。实验考察大体积进样富集影响参数,构建了痕量ZEN在柱富集的HPLC-FLD分析技术,大幅提升了 ZEN的分析灵敏度,检测限达0.2 ng/g。在此基础上,系统优化了色谱流动相组成、流速等参数,建立了 ZEN及其代谢物(α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇以及玉米赤霉酮)6种物质的HPLC分离技术,应用于动物样品分析,肌肉、肝脏样品中ZEN及其代谢物的加标回收率62.7~107.9%,血浆中加标回收率70.7~127.9%,RSD 分别为 3.5~10.3%、3.1~14.9%。第四章,基于所建立的HPLC-FLD技术,开展了 ZEN药物代谢动力学研究,建立了 ZEN在动物(兔)血浆中的药代模型及其组织中的残留分布数据。ZEN在兔体内主要代谢为α-ZOL;经数据分析ZEN代谢模型属于一级吸收二室模型,消除半衰期t1/2β为1.02h,整体清除率CLs为1.18L/h/kg,Cmax为2263.1211g/L,曲线面积AUC为2293.09μg/L/h,表观分布容积V为15.30 L/kg,为动物组织中ZEN代谢过程检测和残留分布提供科学数据。


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