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大白菜推定AP2/ERF转录因子cDNA的分离及表达载体的构建

戚爱华  
【摘要】:AP2族转录因子在植物适应逆境的过程中起着重要的调节作用并具有明显的功能多样性。为了开展AP2族转录因子在大白菜高温胁迫中的功能分析,本研究利用高温诱导处理的大白菜叶片所构建的cDNA文库,在优化cDNA文库筛选方法的基础上,筛选出一个推定AP2/ERF转录因子的全长cDNA,并利用Gateway技术构建入门载体和表达载体,主要结果如下: 1、采用基于PCR技术的96孔板cDNA文库筛选法,利用大白菜与AP2/ERF蛋白同源的EST进行拼接并设计的引物,筛选cDNA文库获得了一个推定AP2/ERF转录因子的阳性cDNA克隆。测序结果表明,该cDNA阳性克隆长度为812bp,含有一个172个氨基酸的开放读码框架,与拟南芥等其它植物的AP2族蛋白有较高的同源性,推测它可能与大白菜适应热胁迫有关。 2、利用Gateway大规模克隆技术分别构建了上述大白菜推定AP2/ERF转录因子入门载体和表达载体,该载体可应用于农杆菌的双子叶植物转化,为该基因功能的分析研究奠定了基础。 本研究为进一步开展AP2族转录因子在大白菜热胁迫响应中的功能分析研究奠定了重要的基础。


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